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做植物组织CHIP实验，超声之前条带总是这么亮，而且不是弥散状态，大家有知道的吗 发自小木虫Android客户端 |
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晋鹏
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+5, 鼓励回帖交流 2017-10-08 09:30:40
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ChIP实验中超声的优化一般从如下几个方面考虑 1 不建议重复已发表的剪切方案而不进行优化。当仪器不同于文献中所使用的仪器时，尤其如此。 2 目前有各种超声破碎仪器，水浴和基于探头的。在使用基于探头的超声破碎仪时，选择一个适用于您的样品体积的探头。 3 在任何情况下，剪切参数都应当根据您的样品体积、细胞密度和细胞类型而优化。 4 优化应当包括功率设置（超声时间 vs. 间隙时间/休息时间）以及获得长度为200 – 1000 bp的DNA片段所需的剪切循环数，每个优化实验只优化一种参数； 5 注意时间和功率设置。过度破碎和太高功率设置会损害在免疫沉淀步骤中的表位。降低ChIP信号。 6 始终保持裂解液冰冷，间断超声，而不是连续，因为超声处理产生热量会使染色质变性。 7 在超声破碎过程中避免气泡。泡沫会导致蛋白质的表面变性，可能使染色质损失在气泡中。为了避免这种情况，一开始设为较低功率，再逐步提高。 8 在优化条件时，每个超声破碎循环后通过琼脂糖凝胶电泳分析DNA片段的长度。剪切不足所产生大的不溶蛋白质  NA:RNA复合物可能堵塞琼脂糖凝胶的孔，并延缓电泳过程。通过消化蛋白质、逆转交联、酚:氯仿提取和沉淀来纯化DNA。 |
2楼2017-10-07 20:47:23
3楼2017-10-08 10:56:16
4楼2017-11-07 12:47:34