应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助】western 封闭液的原理和选择？
71/1返回列表
查看: 2096  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

轩辕十四II

[交流] 【求助】western 封闭液的原理和选择？

如上，越详细越好
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

细胞培养

» 猜你喜欢
1楼 2009-02-17 22:14:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
轩辕十四II(金币+2,VIP+0):谢谢。再请教一下用什么方法什么来进行抗体鉴定呢？ 2-18 20:56
封闭就是降低一抗的非特异结合的概率
因为封闭液本身就是蛋白，封闭就相当于把那些太容易发生非特异结合的位点先给堵上了
一般用BSA或者脱脂牛奶
很多人的经验是：脱脂牛奶封闭后背景比较干净，而检测磷酸化蛋白则用BSA（因脱脂牛奶含有较多的磷酸化蛋白，会干扰的）
赞一下(5人) 回复此楼
2楼2009-02-17 23:14:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★ ★
轩辕十四II(金币+2,VIP+0):谢谢 2-18 21:38
blocking buffer 一般是用1*TBST（TBS+TWEEN20）+脱脂牛奶粉末（有的用PBS+BSA(终浓度10%)如楼上所说），配成终浓度是5%的乳液，主要作用就是把膜上的非特异性位点(疏水结合位点)block住了，这样防止在加primary antibody时产生的非特异性结合；通常blotting的时间是室温2个小时，或者4℃过夜，然后加入到primary antibody溶液（已经稀释1：50）中，进行抗原和抗体的结合。
赞一下(4人) 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
3楼2009-02-18 01:00:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

07shenhan

铁虫 (初入文坛)

十分有用 谢谢

刚接触生物实验，一直在找封闭液的用途，百度了都找不到，在这里可算找到了，谢谢啊！
如果能有更详细地介绍就更好了，呵呵！
赞一下 回复此楼
4楼2009-07-06 21:16:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zplipeng

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by sutao1979 at 2009-2-18 01:00:
blocking buffer 一般是用1*TBST（TBS+TWEEN20）+脱脂牛奶粉末（有的用PBS+BSA(终浓度10%)如楼上所说），配成终浓度是5%的乳液，主要作用就是把膜上的非特异性位点(疏水结合位点)block住了，这样防止在加primary  ...

非常详细，学习下
回复此楼
加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
5楼2009-07-06 21:23:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)
路过顶一下
回复此楼
Nevergiveup!
6楼2009-07-06 22:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nancy20052008

木虫 (正式写手)
在电泳转膜后，膜上其它没有结合蛋白质的空白位置需要用封闭液加以封闭，以避免非特异性结合。这是由于Western Blotting的灵敏度，特异性在很大程度取决于封闭的好坏。过度的封闭导致抗原表位的遮蔽，从而降低检测灵敏度。不完全封闭又会导致最终背景增高或信噪比太低。最常用的封闭液是脱脂奶粉，由于脱脂奶粉的成分比较复杂，里面微量的生物素或碱性磷酸酶就可能造成背景的污染，脱脂奶粉里的其它微量蛋白质有可能和待检测抗原有相似的抗体识别表位而造成交叉反应。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2009-07-07 19:18:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 轩辕十四II 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +7 羊腰板 2026-08-21 7/350 2026-08-21 21:28 by iwuli
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 12/600 2026-08-21 19:46 by kulium
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭