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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助】western 封闭液的原理和选择？
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轩辕十四II

[交流] 【求助】western 封闭液的原理和选择？

如上，越详细越好
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1楼 2009-02-17 22:14:16
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★ ★
轩辕十四II(金币+2,VIP+0):谢谢 2-18 21:38
blocking buffer 一般是用1*TBST（TBS+TWEEN20）+脱脂牛奶粉末（有的用PBS+BSA(终浓度10%)如楼上所说），配成终浓度是5%的乳液，主要作用就是把膜上的非特异性位点(疏水结合位点)block住了，这样防止在加primary antibody时产生的非特异性结合；通常blotting的时间是室温2个小时，或者4℃过夜，然后加入到primary antibody溶液（已经稀释1：50）中，进行抗原和抗体的结合。
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会当凌绝顶，一览众山小
3楼2009-02-18 01:00:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
轩辕十四II(金币+2,VIP+0):谢谢。再请教一下用什么方法什么来进行抗体鉴定呢？ 2-18 20:56
封闭就是降低一抗的非特异结合的概率
因为封闭液本身就是蛋白，封闭就相当于把那些太容易发生非特异结合的位点先给堵上了
一般用BSA或者脱脂牛奶
很多人的经验是：脱脂牛奶封闭后背景比较干净，而检测磷酸化蛋白则用BSA（因脱脂牛奶含有较多的磷酸化蛋白，会干扰的）
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2楼2009-02-17 23:14:18
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07shenhan

铁虫 (初入文坛)

十分有用 谢谢

刚接触生物实验，一直在找封闭液的用途，百度了都找不到，在这里可算找到了，谢谢啊！
如果能有更详细地介绍就更好了，呵呵！
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4楼2009-07-06 21:16:46
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zplipeng

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by sutao1979 at 2009-2-18 01:00:
blocking buffer 一般是用1*TBST（TBS+TWEEN20）+脱脂牛奶粉末（有的用PBS+BSA(终浓度10%)如楼上所说），配成终浓度是5%的乳液，主要作用就是把膜上的非特异性位点(疏水结合位点)block住了，这样防止在加primary  ...

非常详细，学习下
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
5楼2009-07-06 21:23:12
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