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轩辕十四II

[交流] 【求助】western 封闭液的原理和选择?

如上,越详细越好
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07shenhan

铁虫 (初入文坛)

十分有用 谢谢

刚接触生物实验,一直在找封闭液的用途,百度了都找不到,在这里可算找到了,谢谢啊!
如果能有更详细地介绍就更好了,呵呵!
4楼2009-07-06 21:16:46
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查看全部 7 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
轩辕十四II(金币+2,VIP+0):谢谢。再请教一下用什么方法什么来进行抗体鉴定呢? 2-18 20:56
封闭就是降低一抗的非特异结合的概率
因为封闭液本身就是蛋白,封闭就相当于把那些太容易发生非特异结合的位点先给堵上了
一般用BSA或者脱脂牛奶
很多人的经验是:脱脂牛奶封闭后背景比较干净,而检测磷酸化蛋白则用BSA(因脱脂牛奶含有较多的磷酸化蛋白,会干扰的)
2楼2009-02-17 23:14:18
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

★ ★
轩辕十四II(金币+2,VIP+0):谢谢 2-18 21:38
blocking buffer 一般是用1*TBST(TBS+TWEEN20)+脱脂牛奶粉末(有的用PBS+BSA(终浓度10%)如楼上所说),配成终浓度是5%的乳液,主要作用就是把膜上的非特异性位点(疏水结合位点)block住了,这样防止在加primary antibody时产生的非特异性结合;通常blotting的时间是室温2个小时,或者4℃过夜,然后加入到primary antibody溶液(已经稀释1:50)中,进行抗原和抗体的结合。
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2009-02-18 01:00:56
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zplipeng

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by sutao1979 at 2009-2-18 01:00:
blocking buffer 一般是用1*TBST(TBS+TWEEN20)+脱脂牛奶粉末(有的用PBS+BSA(终浓度10%)如楼上所说),配成终浓度是5%的乳液,主要作用就是把膜上的非特异性位点(疏水结合位点)block住了,这样防止在加primary  ...

非常详细,学习下
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
5楼2009-07-06 21:23:12
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