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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 诱导表达测不出酶活
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吴秋兰

新虫 (小有名气)

[求助] 诱导表达测不出酶活 已有1人参与

目前我已经把链酶菌1，3-beta-glucanase基因克隆到BL21可是利用IPTG诱导表达测不来酶活〈利用DNS法测酶活〉，不知道哪位大神帮忙指导指导

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1楼 2017-10-03 22:21:10
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)
同求啊

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2楼2017-10-04 09:27:37
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吴秋兰

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-10-04 09:27:37
同求啊

你是从什么菌里面找到这个产酶基因的呢

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3楼2017-10-04 12:15:18
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)
我是拟南芥的一个基因，菌是bl21

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4楼2017-10-04 12:16:30
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demonhb

新虫 (小有名气)
蛋白跑过胶吗，可能蛋白没表达，或者大多以包涵体形式存在

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5楼2017-10-05 09:40:27
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吴秋兰

新虫 (小有名气)
跑过一次，是有差不多大小的条带出现，可是就是测不出来酶活，我是用昆布多糖为底物去测的

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6楼2017-10-05 15:16:25
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吴秋兰

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-10-04 12:16:30
我是拟南芥的一个基因，菌是bl21

那你是怎么测酶活的呢，蛋白胶有跑出来类似大小的条带么

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7楼2017-10-05 15:17:15
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-10-06 10:04:29
可能是诱导前的菌要培养至OD600=0.5-0.7， 即初级培养物以1：50 比例进行次级培养，大约需要3小时左右（37c x 300rpm）。
此外，IPTG的质量也很重要，进口的要好点；否则，要提高IPTG的量。
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及时行乐，人生不留遗憾！
8楼2017-10-05 15:36:42
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)
bl21不是表达宿主菌，bl21（de3）是用来表达的，需要iptg诱导。

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付出定有回报
9楼2017-10-08 12:55:15
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)
你这个bl21用错了

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付出定有回报
10楼2017-10-08 12:55:29
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