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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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吴秋兰

新虫 (小有名气)

[求助] 诱导表达测不出酶活 已有1人参与

目前我已经把链酶菌1,3-beta-glucanase基因克隆到BL21可是利用IPTG诱导表达测不来酶活〈利用DNS法测酶活〉,不知道哪位大神帮忙指导指导

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极北小白熊

铁虫 (正式写手)

2楼2017-10-04 09:27:37
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吴秋兰

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-10-04 09:27:37
同求啊

你是从什么菌里面找到这个产酶基因的呢

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3楼2017-10-04 12:15:18
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)

我是拟南芥的一个基因,菌是bl21

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4楼2017-10-04 12:16:30
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demonhb

新虫 (小有名气)

蛋白跑过胶吗,可能蛋白没表达,或者大多以包涵体形式存在

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5楼2017-10-05 09:40:27
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吴秋兰

新虫 (小有名气)

跑过一次,是有差不多大小的条带出现,可是就是测不出来酶活,我是用昆布多糖为底物去测的

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6楼2017-10-05 15:16:25
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吴秋兰

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-10-04 12:16:30
我是拟南芥的一个基因,菌是bl21

那你是怎么测酶活的呢,蛋白胶有跑出来类似大小的条带么

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7楼2017-10-05 15:17:15
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-10-06 10:04:29
可能是诱导前的菌要培养至OD600=0.5-0.7, 即初级培养物以1:50 比例进行次级培养,大约需要3小时左右(37c x 300rpm)。
此外,IPTG的质量也很重要,进口的要好点;否则,要提高IPTG的量。
及时行乐,人生不留遗憾!
8楼2017-10-05 15:36:42
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)

bl21不是表达宿主菌,bl21(de3)是用来表达的,需要iptg诱导。

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付出定有回报
9楼2017-10-08 12:55:15
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)

付出定有回报
10楼2017-10-08 12:55:29
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