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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于荧光定量pcr
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走着走着ZZ

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于荧光定量pcr 已有8人参与

Marker为2000，目的条带为300左右，很明显上面的亮带为目的条带，下面100左右的不知道是什么，而且下面的比目的条带还要亮，请问下面的是什么？对实时荧光定量pcr有没有影响？

关于荧光定量pcr


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1楼 2017-09-25 17:24:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

山还在那儿

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-26 07:47:36
很有可能是引物二聚体或者样品污染，需要结合溶解曲线看的
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2楼2017-09-25 17:38:44
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786545816

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-26 07:47:48
荧光定量应该会有影响的，可能是引物的问题。引物二聚体也不像。
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3楼2017-09-25 17:49:44
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山还在那儿

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 走着走着ZZ at 2017-09-25 20:30:50
怎么做溶解曲线？
...

溶解曲线针对染料法而言，即在反应结束增加一个从高到低的降温程序！一般机器会自带，你找找看！祝好！
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8楼2017-09-26 09:38:59
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科研狗进化中

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能引物的专一性不高，试试做一次荧光定量，看一下溶解曲线
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10楼2017-09-26 16:08:44
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静静的泪滴

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉非常像引物二聚体，目的条带也不是很亮，应该是引物设计的不是很到位！
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12楼2017-09-28 14:12:00
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mfl梅凤玲

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

下面的带应该不是引物二聚体，应该是引物的特异性不好，试着调一下退火温度看看，这对荧光定量PCR应该会有影响
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13楼2017-09-29 08:59:02
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普通回帖

郭晓星

新虫 (正式写手)
是用的rtaq酶吗？

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4楼2017-09-25 17:51:23
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走着走着ZZ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 郭晓星 at 2017-09-25 17:51:23
是用的rtaq酶吗？

用的是红酶，用这种酶跑胶不用再加buffer

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5楼2017-09-25 20:30:01
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走着走着ZZ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 山还在那儿 at 2017-09-25 17:38:44
很有可能是引物二聚体或者样品污染，需要结合溶解曲线看的

怎么做溶解曲线？

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6楼2017-09-25 20:30:50
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mhhhwcf059

新虫 (著名写手)
初来乍到，请多多关照。。。
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7楼2017-09-26 00:10:06
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走着走着ZZ

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 山还在那儿 at 2017-09-26 09:38:59
溶解曲线针对染料法而言，即在反应结束增加一个从高到低的降温程序！一般机器会自带，你找找看！祝好！...

谢谢

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9楼2017-09-26 14:59:28
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