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走着走着ZZ

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于荧光定量pcr 已有8人参与

Marker为2000,目的条带为300左右,很明显上面的亮带为目的条带,下面100左右的不知道是什么,而且下面的比目的条带还要亮,请问下面的是什么?对实时荧光定量pcr有没有影响?

关于荧光定量pcr


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山还在那儿

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-26 07:47:36
很有可能是引物二聚体或者样品污染,需要结合溶解曲线看的
2楼2017-09-25 17:38:44
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786545816

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-26 07:47:48
荧光定量应该会有影响的,可能是引物的问题。引物二聚体也不像。
3楼2017-09-25 17:49:44
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山还在那儿

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 走着走着ZZ at 2017-09-25 20:30:50
怎么做溶解曲线?
...

溶解曲线针对染料法而言,即在反应结束增加一个从高到低的降温程序!一般机器会自带,你找找看!祝好!
8楼2017-09-26 09:38:59
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科研狗进化中

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能引物的专一性不高,试试做一次荧光定量,看一下溶解曲线
10楼2017-09-26 16:08:44
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静静的泪滴

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉非常像引物二聚体,目的条带也不是很亮,应该是引物设计的不是很到位!
12楼2017-09-28 14:12:00
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mfl梅凤玲

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

下面的带应该不是引物二聚体,应该是引物的特异性不好,试着调一下退火温度看看,这对荧光定量PCR应该会有影响
13楼2017-09-29 08:59:02
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普通回帖

郭晓星

新虫 (正式写手)

4楼2017-09-25 17:51:23
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走着走着ZZ

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 郭晓星 at 2017-09-25 17:51:23
是用的rtaq酶吗?

用的是红酶,用这种酶跑胶不用再加buffer

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5楼2017-09-25 20:30:01
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走着走着ZZ

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 山还在那儿 at 2017-09-25 17:38:44
很有可能是引物二聚体或者样品污染,需要结合溶解曲线看的

怎么做溶解曲线?

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6楼2017-09-25 20:30:50
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mhhhwcf059

新虫 (著名写手)


初来乍到,请多多关照。。。
7楼2017-09-26 00:10:06
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走着走着ZZ

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 山还在那儿 at 2017-09-26 09:38:59
溶解曲线针对染料法而言,即在反应结束增加一个从高到低的降温程序!一般机器会自带,你找找看!祝好!...

谢谢

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9楼2017-09-26 14:59:28
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