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走着走着ZZ

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 科研狗进化中 at 2017-09-26 16:08:44
可能引物的专一性不高,试试做一次荧光定量,看一下溶解曲线

好的,谢谢

发自小木虫Android客户端
11楼2017-09-26 19:39:42
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静静的泪滴

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉非常像引物二聚体,目的条带也不是很亮,应该是引物设计的不是很到位!
12楼2017-09-28 14:12:00
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mfl梅凤玲

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

下面的带应该不是引物二聚体,应该是引物的特异性不好,试着调一下退火温度看看,这对荧光定量PCR应该会有影响
13楼2017-09-29 08:59:02
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山里的猫先森

新虫 (小有名气)

跑普通PCR看看特异性??
14楼2017-10-22 21:29:57
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draco1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

别白费力气了,这引物多半是废了,重新设计合成吧!
15楼2017-11-22 16:52:30
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ZYY张媛媛

新虫 (初入文坛)

实时荧光定量PCR仪器有自带的熔解曲线程序

发自小木虫Android客户端
16楼2017-12-14 15:32:44
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分子白痴

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感觉是引物二聚体,可以先跑个普通梯度PCR,找到合适的温度,再荧光定量
17楼2017-12-20 09:34:46
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csp3553

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

1.照片不太清楚,如果可以,放清楚照片,我们在帮忙判断;
2.各位同行都已说了,有两种可能,
   一种是引物二聚体,所以形成了很多小于100bp的条带,此时你只能是重新设计引物;
   二是引物专一性不够,但是我本人设计引物专一性不够的话,会跑出好几条条带,不过都是比较靠上的为止。
   此时的解决方法是,要么你在用你的cDNA试一下多个退火温度下PCR产物情况,看是不是还是如此;要么,你重新设计下
   引物,再来试下不同退火温度下的情况。

第一次答疑,可能说的不好,多包涵,谢谢!
18楼2018-01-23 09:50:25
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liuxinchao

新虫 (正式写手)

19楼2018-01-23 15:37:15
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