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T4酶连接试验总是失败
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做T4酶连接试验总是失败，连接完之后转化到DH5α中，最后做菌液PCR总是有很多杂带，请问这是啥原因，有啥改进的方法么，请各位大神指点呀  R0T)Y(G977M~S%B4`%Y(X[6.png |
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2楼2017-09-02 15:38:56
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-02 22:30:28
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-02 22:30:28
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连接之后可以用电泳检测，不过我觉得不太准，你可以试试。T4连接酶你们是有酶切位点还是没有的，如果有酶切位点的可以用酶切验证。没有就只有改进连接比例。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-09-02 15:57:54
5楼2017-09-02 16:12:39
6楼2017-09-02 16:22:21
cry_2013
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7楼2017-09-02 16:22:27
点瓣心音
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8楼2017-09-02 16:51:59
yangmeng0711
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14楼2017-09-02 18:06:20
15楼2017-09-02 18:45:42
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具体我说得不是很详细，你可以搜索北京擎科公司、奥克等公司、宝生公司等，他们都有无缝连接产品的简介。就是在连接时，你扩增出来的目的条带两端各多了15bp左右的与载体互补的碱基序列。 发自小木虫Android客户端 |
16楼2017-09-03 07:36:13
3楼2017-09-02 15:54:23
9楼2017-09-02 17:33:39
10楼2017-09-02 17:34:25