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筱林士人

金虫 (著名写手)

[求助] T4酶连接试验总是失败

做T4酶连接试验总是失败,连接完之后转化到DH5α中,最后做菌液PCR总是有很多杂带,请问这是啥原因,有啥改进的方法么,请各位大神指点呀

T4酶连接试验总是失败
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cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
T4连接要注意载体和片段的摩尔比,转化,还有细胞承受能力吧,感觉这个有时有点运气的成分在里面。。。。
7楼2017-09-02 16:22:27
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查看全部 18 个回答

luoyl210

新虫 (著名写手)

可能连接有问题,也可能是转化的问题

发自小木虫Android客户端
2楼2017-09-02 15:38:56
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筱林士人

金虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by luoyl210 at 2017-09-02 15:38:56
可能连接有问题,也可能是转化的问题

请问有啥改进的办法吗
3楼2017-09-02 15:54:23
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luoyl210

新虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-02 22:30:28
引用回帖:
3楼: Originally posted by 筱林士人 at 2017-09-02 15:54:23
请问有啥改进的办法吗...

连接之后可以用电泳检测,不过我觉得不太准,你可以试试。T4连接酶你们是有酶切位点还是没有的,如果有酶切位点的可以用酶切验证。没有就只有改进连接比例。

发自小木虫Android客户端
4楼2017-09-02 15:57:54
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