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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T4酶连接试验总是失败
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筱林士人

金虫 (著名写手)
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6楼: Originally posted by 能量车gogogo at 2017-09-02 16:22:21
非特异性条带或者是实验过程中污染到其他的DNA，非特异性条带可能是insert本身的问题，如果是实验过程中污染到其他的insert，就要注意实验条件了！

不应该呀，我做了好多组，并且做了好多次都有杂带
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11楼2017-09-02 17:35:58
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筱林士人

金虫 (著名写手)
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8楼: Originally posted by 点瓣心音 at 2017-09-02 16:51:59
如果实验室使用T4 连接克隆基因的成功案列太少，完全可以换成现在的无缝连接。

请问无缝连接您有相关的方法么能否给我分享一下，谢谢！
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12楼2017-09-02 17:37:24
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筱林士人

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cry_2013 at 2017-09-02 16:22:27
T4连接要注意载体和片段的摩尔比，转化，还有细胞承受能力吧，感觉这个有时有点运气的成分在里面。。。。

这些因素我们都考虑到了，但还是不行呀
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13楼2017-09-02 17:39:40
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yangmeng0711

新虫 (小有名气)
双酶切也有可能是有一种酶活性低，改为单酶切，切二次

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14楼2017-09-02 18:06:20
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能量车gogogo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 点瓣心音 at 2017-09-02 16:51:59
如果实验室使用T4 连接克隆基因的成功案列太少，完全可以换成现在的无缝连接。

请问什么叫无缝连接？
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人不会永远十七岁，但永远有人十七岁
15楼2017-09-02 18:45:42
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点瓣心音

木虫 (小有名气)
具体我说得不是很详细，你可以搜索北京擎科公司、奥克等公司、宝生公司等，他们都有无缝连接产品的简介。就是在连接时，你扩增出来的目的条带两端各多了15bp左右的与载体互补的碱基序列。

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16楼2017-09-03 07:36:13
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植物营养

新虫 (小有名气)
提高下退火温度

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17楼2017-10-22 01:39:19
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匿名

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18楼2017-10-22 09:37:30
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