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红木深衣

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[交流] DNA 浓度测定

pcr后切胶回收,测定dna 浓度,如图,出现问题,浓度太低,特征光谱不是260,请大家帮忙分析这是什么情况及可能原因

DNA 浓度测定


DNA 浓度测定-1


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红木深衣

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图一特征光谱是230,图二我就看不懂了

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2楼2017-08-30 10:56:10
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llsskk112233

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问楼主用的试剂盒是什么牌子的,柱子是白色的吗?还有你pcr循环多少

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3楼2017-08-30 22:25:24
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-31 07:43:55
很正常啊 切胶回收后的盐浓度一般会比较高 可以用乙醇沉淀再纯化一次 另外浓度低也是正常 要想高一点 可以通过提高elution温度和时间来增加回收效率
4楼2017-08-31 05:15:51
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红木深衣

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引用回帖:
3楼: Originally posted by llsskk112233 at 2017-08-30 22:25:24
请问楼主用的试剂盒是什么牌子的,柱子是白色的吗?还有你pcr循环多少

天根试剂盒,如图这种柱子,pcr 用的是genstar高保真酶,35个循环
DNA 浓度测定-2



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5楼2017-08-31 13:11:57
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红木深衣

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引用回帖:
4楼: Originally posted by fjtony163 at 2017-08-31 05:15:51
很正常啊 切胶回收后的盐浓度一般会比较高 可以用乙醇沉淀再纯化一次 另外浓度低也是正常 要想高一点 可以通过提高elution温度和时间来增加回收效率

乙醇沉淀再纯化一次,操作试剂步骤能说清楚一点吗?原谅入门小白。你是说最后用水洗脱那一步,水温度高一点吗,加到柱子里等几分钟再离心?

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6楼2017-08-31 13:14:48
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Isaac Li

禁虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
红木深衣: 金币+10 2017-08-31 19:18:18
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7楼2017-08-31 14:52:09
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 红木深衣 at 2017-08-31 13:14:48
乙醇沉淀再纯化一次,操作试剂步骤能说清楚一点吗?原谅入门小白。你是说最后用水洗脱那一步,水温度高一点吗,加到柱子里等几分钟再离心?
...

直接搜索ethanol precipitation 网上有很多protocol。 最后我一般是用qiagen/clonetch的kit里的elution buffer 成分我记得是ph7.5的tris之类的。 溶液加热到70度 放在柱子里5分钟 后再分三次离心 一开始用低速 之后用正常速
8楼2017-08-31 16:51:14
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

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引用回帖:
6楼: Originally posted by 红木深衣 at 2017-08-31 13:14:48
乙醇沉淀再纯化一次,操作试剂步骤能说清楚一点吗?原谅入门小白。你是说最后用水洗脱那一步,水温度高一点吗,加到柱子里等几分钟再离心?
...

另外加温处理是一般用来分离大于1kb的片段的 如果没那么大也不用那种技术了

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2017-08-31 16:52:04
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红木深衣

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送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by fjtony163 at 2017-08-31 16:52:04
另外加温处理是一般用来分离大于1kb的片段的 如果没那么大也不用那种技术了...

感谢!

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10楼2017-08-31 19:17:28
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