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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒表达载体为什么构建的不对

我的目的片段是1500bp,我用的载体是PT28,感受态用的DH5a,两种内切酶是EcoRⅠ和NedⅠ,之前目的基因p出来是1500,可是连接以后我做菌p,跑出来的条带是300bp,求大神指导啊!第一个图是目的基因的pcr,另外这个图是连接以后菌p的。maker是5k的

质粒表达载体为什么构建的不对


质粒表达载体为什么构建的不对-1


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Ivy尘

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
没接上,300bp是空菌的条带(T7/Ter)。

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2楼2017-08-06 16:06:29
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Ivy尘 at 2017-08-06 16:06:29
没接上,300bp是空菌的条带(T7/Ter)。

空菌?是空质粒吗?

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3楼2017-08-06 16:24:30
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Ivy尘

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 拂柳飞絮 at 2017-08-06 16:24:30
空菌?是空质粒吗?
...

你用特异性引物还是通用引物?如果是通用引物,就是空质粒
4楼2017-08-06 16:35:33
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Ivy尘 at 2017-08-06 16:35:33
你用特异性引物还是通用引物?如果是通用引物,就是空质粒...

特异性引物

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5楼2017-08-06 17:03:10
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
提个质粒做个酶切,如果没有就是空载了,没有连接上。
6楼2017-08-06 18:45:55
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-08-06 18:45:55
提个质粒做个酶切,如果没有就是空载了,没有连接上。

有的话条带也不对啊?

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7楼2017-08-06 21:11:27
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小毛虫222

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
菌落PCR是一个快去检验阳性克隆的方法,但是有很多人说其准确度也不是很高,所以你需要提质粒,多提几个菌斑,做酶切,在送去测序

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8楼2017-08-07 08:08:04
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

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引用回帖:
8楼: Originally posted by 小毛虫222 at 2017-08-07 08:08:04
菌落PCR是一个快去检验阳性克隆的方法,但是有很多人说其准确度也不是很高,所以你需要提质粒,多提几个菌斑,做酶切,在送去测序

好的,谢谢!!

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9楼2017-08-07 08:41:21
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小毛虫222 at 2017-08-07 08:08:04
菌落PCR是一个快去检验阳性克隆的方法,但是有很多人说其准确度也不是很高,所以你需要提质粒,多提几个菌斑,做酶切,在送去测序

好的,谢谢!!

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10楼2017-08-07 08:41:32
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