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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒表达载体为什么构建的不对
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒表达载体为什么构建的不对

我的目的片段是1500bp，我用的载体是PT28，感受态用的DH5a，两种内切酶是EcoRⅠ和NedⅠ，之前目的基因p出来是1500，可是连接以后我做菌p，跑出来的条带是300bp，求大神指导啊！第一个图是目的基因的pcr，另外这个图是连接以后菌p的。maker是5k的

质粒表达载体为什么构建的不对


质粒表达载体为什么构建的不对-1


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1楼 2017-08-06 15:44:08
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没接上，300bp是空菌的条带（T7/Ter）。
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拂柳飞絮
2楼2017-08-06 16:06:29
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by Ivy尘 at 2017-08-06 16:06:29
没接上，300bp是空菌的条带（T7/Ter）。

空菌？是空质粒吗？

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3楼2017-08-06 16:24:30
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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3楼: Originally posted by 拂柳飞絮 at 2017-08-06 16:24:30
空菌？是空质粒吗？
...

你用特异性引物还是通用引物？如果是通用引物，就是空质粒
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4楼2017-08-06 16:35:33
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Ivy尘 at 2017-08-06 16:35:33
你用特异性引物还是通用引物？如果是通用引物，就是空质粒...

特异性引物

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5楼2017-08-06 17:03:10
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提个质粒做个酶切，如果没有就是空载了，没有连接上。
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。
6楼2017-08-06 18:45:55
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-08-06 18:45:55
提个质粒做个酶切，如果没有就是空载了，没有连接上。

有的话条带也不对啊？

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7楼2017-08-06 21:11:27
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小毛虫222

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
菌落PCR是一个快去检验阳性克隆的方法，但是有很多人说其准确度也不是很高，所以你需要提质粒，多提几个菌斑，做酶切，在送去测序

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拂柳飞絮 拂柳飞絮
8楼2017-08-07 08:08:04
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
8楼: Originally posted by 小毛虫222 at 2017-08-07 08:08:04
菌落PCR是一个快去检验阳性克隆的方法，但是有很多人说其准确度也不是很高，所以你需要提质粒，多提几个菌斑，做酶切，在送去测序

好的，谢谢！！

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9楼2017-08-07 08:41:21
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
8楼: Originally posted by 小毛虫222 at 2017-08-07 08:08:04
菌落PCR是一个快去检验阳性克隆的方法，但是有很多人说其准确度也不是很高，所以你需要提质粒，多提几个菌斑，做酶切，在送去测序

好的，谢谢！！

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10楼2017-08-07 08:41:32
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