| 查看: 1455 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
RNA浓度太低，求助 已有3人参与
|
||
|
最近刚开始研究生实验，买了试剂盒提取RNA，按照说明书进行，然后测了一下浓度，太低，50左右。不知道哪里出了问题，希望大家能帮忙分析一下或是和我说一说提取RNA的注意事项！谢谢大家！ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
参与限项
已经有3人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有7人回复
-
实验室接单子
已经有4人回复
-
全日制（定向）博士
已经有4人回复
-
对氯苯硼酸纯化
已经有3人回复
-
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？
已经有12人回复
-
不自信的我
已经有12人回复
-
所感
已经有4人回复
-
要不要辞职读博？
已经有7人回复
-
北核录用
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 提取出来的RNA浓度低 OD值1.5几 求助
已经有4人回复
- 怎样提高RNA提取结果中的OD260/230的比值
已经有2人回复
- 提RNA浓度低怎么办！紧急求助
已经有4人回复
- 【求助/交流】提血液RNA浓度很低，怎样使其浓度高从而用于反转录
已经有16人回复
- 【求助/交流】求助：那种方法提取RNA浓度比较高？
已经有18人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
zhouxfd
木虫 (正式写手)
- 应助: 158 (高中生)
- 金币: 4798.3
- 散金: 30
- 红花: 22
- 帖子: 695
- 在线: 72.3小时
- 虫号: 1427827
- 注册: 2011-10-05
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2017-08-03 23:58:28
晋鹏
版主 (知名作家)
- 应助: 626 (博士)
- 贵宾: 0.096
- 金币: 27590.2
- 散金: 1052
- 红花: 288
- 沙发: 2
- 帖子: 5663
- 在线: 726.4小时
- 虫号: 1183978
- 注册: 2011-01-05
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
- 管辖: 农林
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tongyue1992: 金币+2, ★★★很有帮助 2017-08-03 22:28:09
感谢参与，应助指数 +1
tongyue1992: 金币+2, ★★★很有帮助 2017-08-03 22:28:09
|
注意事项： 1.从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。 2．匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。 3．分层和 RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。 预期产量：1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为： 肝和脾 6-10μg ,肾3-4μg ,骨骼肌和脑组织1-1.5μg ,胎盘1-4μg ,上皮细胞8-15μg ,成纤维细胞5-7μg 。 常见问题分析： 得率低：A.样品裂解或匀浆处理不彻底 B．RNA沉淀未完全溶解 A260/A280<1.65 ：A.检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中。低离子浓度和低pH值条件下A280值偏高 B．样品匀浆时加的试剂量太少 C．匀浆样品时未在室温放置5分钟 D．吸取水相时混入了有机相 E．RNA沉淀未完全溶解。 |
2楼2017-08-03 22:19:25
3楼2017-08-03 22:29:29
5楼2017-08-15 20:07:54