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RNA浓度太低，求助 已有3人参与
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最近刚开始研究生实验，买了试剂盒提取RNA，按照说明书进行，然后测了一下浓度，太低，50左右。不知道哪里出了问题，希望大家能帮忙分析一下或是和我说一说提取RNA的注意事项！谢谢大家！ 发自小木虫Android客户端 |
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3楼2017-08-03 22:29:29
晋鹏
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tongyue1992: 金币+2, ★★★很有帮助 2017-08-03 22:28:09
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注意事项： 1.从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。 2．匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。 3．分层和 RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。 预期产量：1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为： 肝和脾 6-10μg ,肾3-4μg ,骨骼肌和脑组织1-1.5μg ,胎盘1-4μg ,上皮细胞8-15μg ,成纤维细胞5-7μg 。 常见问题分析： 得率低：A.样品裂解或匀浆处理不彻底 B．RNA沉淀未完全溶解 A260/A280<1.65 ：A.检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中。低离子浓度和低pH值条件下A280值偏高 B．样品匀浆时加的试剂量太少 C．匀浆样品时未在室温放置5分钟 D．吸取水相时混入了有机相 E．RNA沉淀未完全溶解。 |
2楼2017-08-03 22:19:25
zhouxfd
木虫 (正式写手)
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4楼2017-08-03 23:58:28
5楼2017-08-15 20:07:54
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