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关于Western blot背景太脏的问题 已有7人参与
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组织蛋白，总上样量为40ug，用10%的胶，60v电泳浓缩胶，80v电泳分离胶，200mA转膜2小时，之后5%脱脂奶粉封闭2小时，一抗以一抗稀释液1：1000稀释，因为没有4℃冰柜，以前都是一抗在垂直混悬仪孵育过夜，第二天以1XTBST洗条带5min6次，二抗1：2000孵育2小时，1XTBST洗带条5min6次后用高敏曝光剂曝光，如下图，之后改变了很多次条件，包括一抗敷育时间减少到常温4小时，稀释一抗至1：10000，二抗稀释至1：10000等，结果都是一样，求助！万分感谢！  发自小木虫Android客户端 |
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jurkat.1640
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2楼2017-08-02 10:41:24
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xiao2189818
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给你个建议 37度温箱2h 尽量让一抗覆盖住pvdf膜 然后 拿出来洗脱3次 弄2抗2h 完了后泡到tbst中 第二天拿出来曝光就行 其实我做了好久 感觉做完直接曝光最好 你这个洗脱不要少 能保存到4度是最好的 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-08-04 22:26:43
xiao2189818
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6楼2017-08-04 22:27:46
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缩短1抗时间，更改封闭液组份并延长时间，缩短二抗时间，加大稀释比例，几步漂洗液更换一下，更改一下离子浓度，，western 就是一个摸索的过程，不要急 发自小木虫Android客户端 |
7楼2017-08-05 09:31:07
8楼2017-08-05 18:13:47
9楼2017-08-05 18:39:58