应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 关于Western blot背景太脏的问题
51/1返回列表
查看: 4507  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yandalan

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于Western blot背景太脏的问题 已有7人参与

组织蛋白，总上样量为40ug，用10%的胶，60v电泳浓缩胶，80v电泳分离胶，200mA转膜2小时，之后5%脱脂奶粉封闭2小时，一抗以一抗稀释液1：1000稀释，因为没有4℃冰柜，以前都是一抗在垂直混悬仪孵育过夜，第二天以1XTBST洗条带5min6次，二抗1：2000孵育2小时，1XTBST洗带条5min6次后用高敏曝光剂曝光，如下图，之后改变了很多次条件，包括一抗敷育时间减少到常温4小时，稀释一抗至1：10000，二抗稀释至1：10000等，结果都是一样，求助！万分感谢！

关于Western blot背景太脏的问题


关于Western blot背景太脏的问题-1


发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-07-30 14:32:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学药的孩纸

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的抗体特异性好嘛，之前做出来过比较清楚的背景吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-08-05 18:13:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
室温2 h内就够了，如果抗体特异性不好，回收使用的抗体效果更好。
赞一下 回复此楼
2楼2017-08-02 10:41:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

knighthan112

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不要用脱脂奶粉 用牛血清白蛋白试试。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-08-04 17:17:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最爱琪琪

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
抗体可以用牛奶配试一下

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-08-04 21:11:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 287求调剂 +10 晨昏线与星海 2026-03-19 11/550 2026-03-25 10:35 by userper
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +5 谷雨上岸 2026-03-23 6/300 2026-03-24 16:32 by laoshidan
[考研] 277分求调剂，跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭