| 查看: 4512 | 回复: 8 | |||
[交流]
关于Western blot背景太脏的问题 已有7人参与
|
组织蛋白，总上样量为40ug，用10%的胶，60v电泳浓缩胶，80v电泳分离胶，200mA转膜2小时，之后5%脱脂奶粉封闭2小时，一抗以一抗稀释液1：1000稀释，因为没有4℃冰柜，以前都是一抗在垂直混悬仪孵育过夜，第二天以1XTBST洗条带5min6次，二抗1：2000孵育2小时，1XTBST洗带条5min6次后用高敏曝光剂曝光，如下图，之后改变了很多次条件，包括一抗敷育时间减少到常温4小时，稀释一抗至1：10000，二抗稀释至1：10000等，结果都是一样，求助！万分感谢！  发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有183人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- MolEPI: 1
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17175
- 散金: 1654
- 红花: 121
- 沙发: 41
- 帖子: 14525
- 在线: 2184.9小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
2楼2017-08-02 10:41:24
3楼2017-08-04 17:17:52
4楼2017-08-04 21:11:39
xiao2189818
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2062.1
- 散金: 1258
- 红花: 6
- 帖子: 763
- 在线: 101.1小时
- 虫号: 6300420
- 注册: 2017-04-12
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
给你个建议 37度温箱2h 尽量让一抗覆盖住pvdf膜 然后 拿出来洗脱3次 弄2抗2h 完了后泡到tbst中 第二天拿出来曝光就行 其实我做了好久 感觉做完直接曝光最好 你这个洗脱不要少 能保存到4度是最好的 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-08-04 22:26:43
xiao2189818
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2062.1
- 散金: 1258
- 红花: 6
- 帖子: 763
- 在线: 101.1小时
- 虫号: 6300420
- 注册: 2017-04-12
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2017-08-04 22:27:46
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
缩短1抗时间，更改封闭液组份并延长时间，缩短二抗时间，加大稀释比例，几步漂洗液更换一下，更改一下离子浓度，，western 就是一个摸索的过程，不要急 发自小木虫Android客户端 |
7楼2017-08-05 09:31:07
8楼2017-08-05 18:13:47
9楼2017-08-05 18:39:58
