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汕头大学海洋科学接受调剂
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yandalan

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于Western blot背景太脏的问题 已有7人参与

组织蛋白,总上样量为40ug,用10%的胶,60v电泳浓缩胶,80v电泳分离胶,200mA转膜2小时,之后5%脱脂奶粉封闭2小时,一抗以一抗稀释液1:1000稀释,因为没有4℃冰柜,以前都是一抗在垂直混悬仪孵育过夜,第二天以1XTBST洗条带5min6次,二抗1:2000孵育2小时,1XTBST洗带条5min6次后用高敏曝光剂曝光,如下图,之后改变了很多次条件,包括一抗敷育时间减少到常温4小时,稀释一抗至1:10000,二抗稀释至1:10000等,结果都是一样,求助!万分感谢!

关于Western blot背景太脏的问题


关于Western blot背景太脏的问题-1


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13163896856

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
明显是抗体不好,特异性差

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9楼2017-08-05 18:39:58
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
室温2 h内就够了,如果抗体特异性不好,回收使用的抗体效果更好。
2楼2017-08-02 10:41:24
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knighthan112

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不要用脱脂奶粉 用牛血清白蛋白试试。
3楼2017-08-04 17:17:52
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最爱琪琪

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
抗体可以用牛奶配试一下

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4楼2017-08-04 21:11:39
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