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PCR扩增约6000bp质粒，一直失败 已有7人参与
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准备用Gibson Assembly Mix把一个片段插入一个质粒，所以在这个操作前，先用PCR把同源臂扩入这个质粒。质粒全长6000bp多。PCR中，使用Q5-HF， 25微升推荐的体系。正向引物TM59.2. 反向引物TM54.2。程序如下：98度30秒， 98度30秒，50-58度梯度7分，72度30秒，72度10分，6度无限长hold。 最后扩增出来的条带图如下：全部积在槽子里。不知道怎么回事，求指点。  ChemiDoc MP 2017-06-29 13hr 35min(new linker primers for 1b and 2b vector).jpg |
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5楼2017-06-30 09:49:42
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