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最近做分子克隆，pet28a的载体，我用的是nde1和xho1两个酶切位点，菌液pcr全部是阳性，但双酶切后就是没有插入片段，请教，是否要换酶切位点？是不是pet28a载体的xhoI不好用呢 发自小木虫Android客户端 |
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fengshen2005
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-25 09:32:40
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-25 09:32:40
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菌液PCR假阳性很高（你的片段不管是否连入载体，仍然被你铺在平板上，你挑点菌斑以外的培养基都能P出你的条带），能长出斑说明你载体没切好 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-06-25 05:49:08
伤何处
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xmcw7658楼2017-06-28 16:44:39
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不明非
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6楼2017-06-27 16:17:00
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我是20ul体系切1ng，我也认为是载体没切开，但我不知道是不是这个载体上酶切位点的问题，因为其他载体我用同样的体系都没问题，不知道你有用过28a上同样的酶切位点吗？ 发自小木虫Android客户端 |
7楼2017-06-27 23:40:42
9楼2017-06-30 08:07:21
10楼2017-06-30 08:09:14