24小时热门版块排行榜    

查看: 2118  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xmcw765

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助分子克隆 已有1人参与

最近做分子克隆,pet28a的载体,我用的是nde1和xho1两个酶切位点,菌液pcr全部是阳性,但双酶切后就是没有插入片段,请教,是否要换酶切位点?是不是pet28a载体的xhoI不好用呢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcw765

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by jerry110 at 2017-06-28 16:44:39
酶都是常用的酶,没有问题,我认为载体浓度高本身切的就会不好,此外基因片段是pcr产物比载体难切,片段切的不好也会出现验证假阳性,你可以参考一下酶的说明书,祝好!...

非常感谢,问题解决了,已经构建出来了

发自小木虫Android客户端
10楼2017-06-30 08:09:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

fengshen2005

银虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-25 09:32:40
菌液PCR假阳性很高(你的片段不管是否连入载体,仍然被你铺在平板上,你挑点菌斑以外的培养基都能P出你的条带),能长出斑说明你载体没切好

发自小木虫Android客户端
2楼2017-06-25 05:49:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
切不出来,你就送几个样去测序确定下到底插入没。如果测序有结果的话,看看酶切位点有变化没。没变化的话,可能就是你酶的问题。或者你酶切的时候,再拿空载作对照一起酶切,看看能不能切开
对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
3楼2017-06-25 13:43:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcw765

新虫 (初入文坛)

测序发现是空载,明天做单酶切验证载体

发自小木虫Android客户端
4楼2017-06-26 01:06:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +7 junqihahaha 2026-03-26 7/350 2026-03-26 16:51 by allen-yin
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 352求调剂 +4 大米饭! 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +5 曼111 2026-03-24 6/300 2026-03-26 13:04 by 13756423260
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。,。,。,。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 289求调剂 +9 怀瑾握瑜l 2026-03-20 9/450 2026-03-25 11:02 by userper
[考研] 286求调剂 +11 Faune 2026-03-21 11/550 2026-03-25 10:11 by 雾散后相遇lc
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见