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yafen0628金虫 (正式写手)
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PCR污染，存在假阳性带，，盼大神急救 已有3人参与
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我在PCR过程中遇到很奇葩的现象，阴性对照组（模板为水），会P出来阳性条带，而且与目的带（目的带在186bp左右）大小在同一位置。 1，尝试了更换不同的退火温度（58/62/65），假阳性带依然存在。。。。, 2，曾经以为假阳性带会是交叉引物二聚体类产物，尝试了PCR体系中添加5%DMSO以及将引物100℃煮沸再用，结果还是存在假阳性。。 3，试着换掉了TAQ酶及DNTP还有水，依然是徒劳。。。 下图的左一模板为水，后面依次为不同浓度的阳性模板。。PCR的退火温度为58℃，循环数目35. 我想请教下各位大神，还有什么好的办法来找到PCR污染或者假阳性带的原因，或者是不是因为目的带偏小，所以才会遇到这种问题呢，尝试了各种办法，最近真是被愁死了，要P疯了。。。  20170516 HHV8 35 cycle.JPG |
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5楼2017-06-23 09:04:09
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重新开启了新合成的引物，结果是一样的。然后重新设计了其他的引物（目的片段均比较小，小于200），还是有这种现象出现。难道会是PCR的退火温度需要再摸索？ 发自小木虫IOS客户端 |
7楼2017-06-23 13:04:52
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哦，那就不知道原因了，我以前也遇到过这种问题，不过我用的是mix,当时换个mix就好了，也怀疑过水有问题，不过换了很多水还是有带，一般是很短的片段，如果扩的是很长的片段，一般不会有带的。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-06-23 08:30:53
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