PCR污染，存在假阳性带，，盼大神急救 - 分子生物 - PCR相关

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少女冲冲

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11楼2017-06-23 19:48:53

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少女冲冲

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我和你的问题一样样的，我那个第一排后六个的前三个是没有加模板的阴性对照，全都有你要的条带要疯了，你找到解决办法了么，会不会是引物被污染了

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12楼2017-06-23 19:50:38

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spritesu

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pcr从来不做隐性对照的再次汗颜…

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spritesu

13楼2017-06-23 20:22:47

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yafen0628

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12楼: Originally posted by 少女冲冲 at 2017-06-23 19:50:38
我和你的问题一样样的，我那个第一排后六个的前三个是没有加模板的阴性对照，全都有你要的条带要疯了，你找到解决办法了么，会不会是引物被污染了

没有呢找不到原因

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14楼2017-06-23 22:26:49

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茜囡贝贝

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换个人试试，让别人帮忙做一次，只有你的实验是这样子吗？

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15楼2017-06-23 23:41:20

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yedansky

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我也出现过这种情况，以水作模板，出现非特异性条带，后来换了二相水，这个问题就解决了。每次水操作过一次就丢

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16楼2017-06-24 08:45:00

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znl2018

哦

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17楼2017-06-24 08:56:02

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yafen0628

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16楼: Originally posted by yedansky at 2017-06-24 08:45:00
我也出现过这种情况，以水作模板，出现非特异性条带，后来换了二相水，这个问题就解决了。每次水操作过一次就丢

嗯，我们的水是买的商业化做PCR的，应该不会有问题。而且，我每次用的都是新的

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18楼2017-06-24 09:01:24

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yafen0628

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4楼: Originally posted by as1688816 at 2017-06-23 08:30:53
哦，那就不知道原因了，我以前也遇到过这种问题，不过我用的是mix,当时换个mix就好了，也怀疑过水有问题，不过换了很多水还是有带，一般是很短的片段，如果扩的是很长的片段，一般不会有带的。
...

你的意思是说，目的带太短了，所以才会有这种假阳性带？

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19楼2017-06-24 09:04:40

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as1688816

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19楼: Originally posted by yafen0628 at 2017-06-24 09:04:40
你的意思是说，目的带太短了，所以才会有这种假阳性带？
...

这个不清楚，只是遇到这种情况，其实PCR遇到假阳性是最令人头疼的，实验试剂可以一个一个换换试试，多用其他的引物也扩扩，没其他办法，只能一个个排除。

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20楼2017-06-24 09:12:39

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