| 查看: 2746 | 回复: 34 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
yafen0628金虫 (正式写手)
|
[求助]
PCR污染，存在假阳性带，，盼大神急救 已有3人参与
|
|
|
我在PCR过程中遇到很奇葩的现象，阴性对照组（模板为水），会P出来阳性条带，而且与目的带（目的带在186bp左右）大小在同一位置。 1，尝试了更换不同的退火温度（58/62/65），假阳性带依然存在。。。。, 2，曾经以为假阳性带会是交叉引物二聚体类产物，尝试了PCR体系中添加5%DMSO以及将引物100℃煮沸再用，结果还是存在假阳性。。 3，试着换掉了TAQ酶及DNTP还有水，依然是徒劳。。。 下图的左一模板为水，后面依次为不同浓度的阳性模板。。PCR的退火温度为58℃，循环数目35. 我想请教下各位大神，还有什么好的办法来找到PCR污染或者假阳性带的原因，或者是不是因为目的带偏小，所以才会遇到这种问题呢，尝试了各种办法，最近真是被愁死了，要P疯了。。。  20170516 HHV8 35 cycle.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有57人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
971731043
新虫 (职业作家)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 18007.3
- 散金: 380
- 红花: 10
- 帖子: 3172
- 在线: 331.5小时
- 虫号: 3401187
- 注册: 2014-09-05
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
9楼2017-06-23 14:42:44
as1688816
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3102.7
- 散金: 3000
- 红花: 5
- 帖子: 821
- 在线: 205.7小时
- 虫号: 1213860
- 注册: 2011-02-26
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2017-06-22 23:21:05
yafen0628
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5908.2
- 红花: 1
- 帖子: 383
- 在线: 75.9小时
- 虫号: 1329658
- 注册: 2011-06-23
- 性别: MM
- 专业: 免疫生物学
3楼2017-06-23 06:48:17
as1688816
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3102.7
- 散金: 3000
- 红花: 5
- 帖子: 821
- 在线: 205.7小时
- 虫号: 1213860
- 注册: 2011-02-26
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-23 23:23:05
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-23 23:23:05
|
哦，那就不知道原因了，我以前也遇到过这种问题，不过我用的是mix,当时换个mix就好了，也怀疑过水有问题，不过换了很多水还是有带，一般是很短的片段，如果扩的是很长的片段，一般不会有带的。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-06-23 08:30:53