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TA克隆连接方向问题，实验室小白，求大神们指教！ 已有4人参与
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TA连接方向问题。我用pMD19T simple 和带有BamH1和Hind3的PCR产物链接，怎么验证它的连接方向呢？ 我接下来要连接到pET-32a 上表达，已经确定用这两个酶切位点可以正向连在pET-32a上了，还需要验证PCR产物在克隆载体上的方向吗？ @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
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14楼2017-06-10 07:15:07
MulanQahar
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第一种方法，Sequencing. 第二种是，找一个离bamh 1 或 离hind3 近的digestion site. 然后用双酶切 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4楼2017-06-09 10:03:36
MulanQahar
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用双酶切的时候，一般不会有这种情况。但是常常有很多的意外发生。比如mutation. 还有就是，你的pcr 产物或许有问题的情况也都有。因为pcr的时候，能读的长度是有限的。 发自小木虫Android客户端 |
9楼2017-06-09 10:38:47
渊博震天
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18楼2017-06-10 12:06:35
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7楼2017-06-09 10:27:10
8楼2017-06-09 10:34:44
MulanQahar
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【答案】应助回帖
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不要找载体上的切点。找pcr产物上的切点。除了那两个。知道你的pcr产物的sequence吗？用NEB cutter 可以找到酶切点 发自小木虫Android客户端 |
10楼2017-06-09 10:45:18