应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求各位生物专业类大神解惑！！！急～～
91/1返回列表
查看: 967  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Lulu与璐璐

新虫 (正式写手)

[求助] 求各位生物专业类大神解惑！！！急～～ 已有2人参与

本人生物类专业本科一枚，毕业课题中的内容有一点儿疑惑：克隆得到一个基因片段，通过酶切连接的方法与L4440质粒构成重组质粒，转化感受态细胞，涂板后挑取了单菌落。摇菌培养后，直接以基因片段的引物为引物，以菌液为模版进行PCR，扩出来的电泳条带会比直接克隆得到的基因片段条带大200bP左右吗？
这是正常现象吗？
为什么会出现这种现象啊？
请各位生物专业类大神答疑解惑～
十分感谢！！！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-06-04 23:50:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stephen.xie

铁虫 (正式写手)
不会吧，没遇到过，建议再p一次

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-06-05 07:56:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-06 07:47:38
你是怎么知道长200bp左右？因为对于比较大的片段，差200bp在电泳时不太好区别的。还有你做菌液PCR的时候，是拿之前的基因片段做阳性对照么？然后一起跑胶？
不用太纠结这个结果，送去测序之后就知道 到底有没有多200bp了  

祝实验顺利
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Lulu与璐璐
对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
3楼2017-06-05 11:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

远望集团

金虫 (正式写手)
可以测个序看看
回复此楼
只要努力，一切皆有可能！更美的风景在那片更高的天空。。。
4楼2017-06-05 19:39:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lulu与璐璐

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stephen.xie at 2017-06-05 07:56:22
不会吧，没遇到过，建议再p一次

在小木虫中一些帖子中也出现了类似的情况～构建的两个基因片段都是酱紫的情况～

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2017-06-05 21:33:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lulu与璐璐

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 远望集团 at 2017-06-05 19:39:05
可以测个序看看

测序结果显示无误

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-06-05 21:33:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lulu与璐璐

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-05 11:21:25
你是怎么知道长200bp左右？因为对于比较大的片段，差200bp在电泳时不太好区别的。还有你做菌液PCR的时候，是拿之前的基因片段做阳性对照么？然后一起跑胶？
不用太纠结这个结果，送去测序之后就知道 到底有没有多2 ...

菌液PCR产物电泳条带显示比之前克隆出来的目标基因条带 大约大了200左右～
另外测序结果显示是正确的，做菌液PCR的目的是为了验证构建重组表达载体中是否插入了目标基因，虽然菌液PCR电泳条带比目标基因条带长了，但拿去测序结果完全正确。不影响后续实验，但我现在面临毕业答辩，这一点儿不知道原因，感觉自己面临评委老师的提问无法解释～

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-06-05 21:40:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伤何处

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Lulu与璐璐 at 2017-06-05 21:40:47
菌液PCR产物电泳条带显示比之前克隆出来的目标基因条带 大约大了200左右～
另外测序结果显示是正确的，做菌液PCR的目的是为了验证构建重组表达载体中是否插入了目标基因，虽然菌液PCR电泳条带比目标基因条带长了， ...

那就没问题呢。放心，评委老师应该不会发现你电泳条带上多了200bp这个问题的~
赞一下(2人) 回复此楼
对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
8楼2017-06-05 22:13:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌绯韵

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-06-06 07:47:53
楼主要看看你做pcr的酶的活性和保真性，活性特别高的酶会p出一些大一点的条带，但是测序没什么问题。要不就看跑胶上样的上样loading和电泳缓冲液，跑胶中样品盐离子浓度低会跑出偏大或者偏小的条带或者会有杂带，换个高盐离子浓度的上样loading条带就单一正常了。既然你有引物，可以做个菌落pcr鉴定再挑菌摇菌啊，之后提质粒酶切验证，最后酶切电泳图是最准的，酶切验证正确的送测序一般就看看有没有点突变了。你的毕业答辩要是加上酶切说服力会好一点，菌液PCR条带大也不是大问题了。
赞一下 回复此楼
9楼2017-06-06 00:16:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Lulu与璐璐 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕318求调剂 +10 February_Feb 2026-03-01 12/600 2026-03-01 23:34 by L135790
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 0857调剂 +3 一ll半 2026-02-28 3/150 2026-03-01 18:32 by 热情沙漠
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭