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Lulu与璐璐

新虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 5470.3
帖子: 588
在线: 5小时
虫号: 4687764
注册: 2016-05-13
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 求各位生物专业类大神解惑！！！急～～已有2人参与

本人生物类专业本科一枚，毕业课题中的内容有一点儿疑惑：克隆得到一个基因片段，通过酶切连接的方法与L4440质粒构成重组质粒，转化感受态细胞，涂板后挑取了单菌落。摇菌培养后，直接以基因片段的引物为引物，以菌液为模版进行PCR，扩出来的电泳条带会比直接克隆得到的基因片段条带大200bP左右吗？
这是正常现象吗？
为什么会出现这种现象啊？
请各位生物专业类大神答疑解惑～
十分感谢！！！

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1楼 2017-06-04 23:50:46

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

凌绯韵

铜虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 99.5
帖子: 4
在线: 2小时
虫号: 4496919
注册: 2016-03-12
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-06-06 07:47:53

楼主要看看你做pcr的酶的活性和保真性，活性特别高的酶会p出一些大一点的条带，但是测序没什么问题。要不就看跑胶上样的上样loading和电泳缓冲液，跑胶中样品盐离子浓度低会跑出偏大或者偏小的条带或者会有杂带，换个高盐离子浓度的上样loading条带就单一正常了。既然你有引物，可以做个菌落pcr鉴定再挑菌摇菌啊，之后提质粒酶切验证，最后酶切电泳图是最准的，酶切验证正确的送测序一般就看看有没有点突变了。你的毕业答辩要是加上酶切说服力会好一点，菌液PCR条带大也不是大问题了。