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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Lulu与璐璐

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 求各位生物专业类大神解惑！！！急～～ 已有2人参与

本人生物类专业本科一枚，毕业课题中的内容有一点儿疑惑：克隆得到一个基因片段，通过酶切连接的方法与L4440质粒构成重组质粒，转化感受态细胞，涂板后挑取了单菌落。摇菌培养后，直接以基因片段的引物为引物，以菌液为模版进行PCR，扩出来的电泳条带会比直接克隆得到的基因片段条带大200bP左右吗？
这是正常现象吗？
为什么会出现这种现象啊？
请各位生物专业类大神答疑解惑～
十分感谢！！！

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1楼 2017-06-04 23:50:46
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Lulu与璐璐

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-05 11:21:25
你是怎么知道长200bp左右？因为对于比较大的片段，差200bp在电泳时不太好区别的。还有你做菌液PCR的时候，是拿之前的基因片段做阳性对照么？然后一起跑胶？
不用太纠结这个结果，送去测序之后就知道 到底有没有多2 ...

菌液PCR产物电泳条带显示比之前克隆出来的目标基因条带 大约大了200左右～
另外测序结果显示是正确的，做菌液PCR的目的是为了验证构建重组表达载体中是否插入了目标基因，虽然菌液PCR电泳条带比目标基因条带长了，但拿去测序结果完全正确。不影响后续实验，但我现在面临毕业答辩，这一点儿不知道原因，感觉自己面临评委老师的提问无法解释～

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7楼2017-06-05 21:40:47
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stephen.xie

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
不会吧，没遇到过，建议再p一次

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2楼2017-06-05 07:56:22
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伤何处

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-06 07:47:38
你是怎么知道长200bp左右？因为对于比较大的片段，差200bp在电泳时不太好区别的。还有你做菌液PCR的时候，是拿之前的基因片段做阳性对照么？然后一起跑胶？
不用太纠结这个结果，送去测序之后就知道 到底有没有多200bp了  

祝实验顺利
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Lulu与璐璐
对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
3楼2017-06-05 11:21:25
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Lulu与璐璐

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by stephen.xie at 2017-06-05 07:56:22
不会吧，没遇到过，建议再p一次

在小木虫中一些帖子中也出现了类似的情况～构建的两个基因片段都是酱紫的情况～

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5楼2017-06-05 21:33:01
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