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leviolet

新虫 (小有名气)


[交流] 启动子植物表达载体

采用双酶切把启动子序列从p19―T载体上切下,后于相同酶切开的pbi121―gus载体酶连,经过大肠杆菌top10(抗性kan)转化,菌液pcr结果条带不亮,有条带菌扩大培养提取质粒,农杆菌lba4404点击转化,涂板(抗性kan+rif)菌落挺多,挑菌摇了后PCR检测没有条带了,这是什么原因呢?有没有遇到这个情况滴?本人刚开始做分子实验不太懂,希望懂滴好人能帮忙分析下可能是哪个步骤有问题?

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cqqxmc

新虫 (小有名气)



leviolet(金币+1): 谢谢参与
你第一次的菌落PCR条带不亮,有可能就是假阳性,没有连接或转化成功
3楼2017-05-22 08:53:45
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1053705002

新虫 (初入文坛)



leviolet(金币+1): 谢谢参与
菌液pcr结果条带不亮有一种可能是结果是假阳性,引物特异性不好,话说可以向你要点top10的菌吗?我最近在转化大质粒到dh10b中,但是一直没有成功,有人建议我用top10,能否分享一点,谢谢!
4楼2017-07-27 16:47:49
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2452127600

新虫 (初入文坛)



leviolet(金币+1): 谢谢参与
最终是怎么解决的呢?现在也遇到类似问题,求指教

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7楼2017-12-19 22:06:40
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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)



leviolet(金币+1): 谢谢参与
你们不测序的吗?

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8楼2017-12-20 00:31:22
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简单回复
shagen2楼
2017-05-21 19:38   回复  
leviolet(金币+1): 谢谢参与
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nono20095楼
2017-07-27 21:03   回复  
leviolet(金币+1): 谢谢参与
李慧玲6楼
2017-07-27 22:27   回复  
leviolet(金币+1): 谢谢参与
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