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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 启动子植物表达载体
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leviolet

新虫 (小有名气)

[交流] 启动子植物表达载体

采用双酶切把启动子序列从p19―T载体上切下，后于相同酶切开的pbi121―gus载体酶连，经过大肠杆菌top10（抗性kan）转化，菌液pcr结果条带不亮，有条带菌扩大培养提取质粒，农杆菌lba4404点击转化，涂板（抗性kan+rif）菌落挺多,挑菌摇了后PCR检测没有条带了，这是什么原因呢？有没有遇到这个情况滴？本人刚开始做分子实验不太懂，希望懂滴好人能帮忙分析下可能是哪个步骤有问题？

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1楼 2017-05-21 19:12:17
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cqqxmc

新虫 (小有名气)
★
leviolet(金币+1): 谢谢参与
你第一次的菌落PCR条带不亮，有可能就是假阳性，没有连接或转化成功
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3楼2017-05-22 08:53:45
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1053705002

新虫 (初入文坛)
★
leviolet(金币+1): 谢谢参与
菌液pcr结果条带不亮有一种可能是结果是假阳性，引物特异性不好，话说可以向你要点top10的菌吗？我最近在转化大质粒到dh10b中，但是一直没有成功，有人建议我用top10，能否分享一点，谢谢！
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4楼2017-07-27 16:47:49
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2452127600

新虫 (初入文坛)
★
leviolet(金币+1): 谢谢参与
最终是怎么解决的呢？现在也遇到类似问题，求指教

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7楼2017-12-19 22:06:40
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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)
★
leviolet(金币+1): 谢谢参与
你们不测序的吗？

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8楼2017-12-20 00:31:22
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shagen2楼
2017-05-21 19:38   回复  
leviolet(金币+1): 谢谢参与
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