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蘑菇飞

新虫 (正式写手)

[求助] western blot条带问题 已有5人参与

条带显色不清,为什么?

western blot条带问题


western blot条带问题-1


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qilong_2007

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用的什么显色?
建议使用ECL化学发光法,发光信号较稳定,便于反复曝光操作,我们用的炎熙生物的试剂盒,建议去他们网站看看,有相关介绍。
http://www.biothrive.cn/Product/0294753539.html
6楼2017-05-17 21:31:21
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F翔T

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

信号弱可以采用这几种办法来解决,1.延长曝光时间,曝光时间不是固定的,可以根据你信号的强弱来调整,如果信号比较强就短一点几秒甚至更短。2.采用超强发光液,会比普通的好很多哦。3.增加你的蛋白总量,总蛋白多了,目的蛋白就多了,这样一抗结合的就多了,然后结合上去的二抗,发光液就更多了,当然信号就会更强了。
背景比较脏,首先是封闭,其次就是没洗干净了,可以适当增加封闭时间,或一抗二抗过后洗的时间长一点。
7楼2017-05-18 22:34:27
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蘑菇飞

新虫 (正式写手)

今天照的,发现条带显色都浅,右边有黑乎乎的,不知道是什么。求虫友解答。每一次拍照都要换膜吗?这个是换保鲜膜后拍的。显色1min。

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2楼2017-05-15 14:21:40
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蘑菇飞

新虫 (正式写手)

显色时间要求严格吗?原理是什么?新做wb,出的条带都不好。特来向广大虫友求助

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3楼2017-05-15 14:24:20
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
信号弱,膜不干净,曝光时间短。
4楼2017-05-16 15:21:16
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蘑菇飞

新虫 (正式写手)

哦,谢谢。这个曝光时间1min,“信号弱”是因为蛋白含量少吗?

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5楼2017-05-16 17:02:31
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蘑菇飞

新虫 (正式写手)

谢谢,我试试加长洗的时间

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8楼2017-05-19 09:08:37
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______风车

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

左右条带亮度不一样,有可能是抗体没有孵育均匀,一抗二抗最好可以在摇床上。
9楼2017-05-19 11:06:13
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zkapan

禁虫 (小有名气)

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10楼2017-05-19 13:24:31
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