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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western blot条带问题
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蘑菇飞

新虫 (正式写手)

[求助] western blot条带问题 已有5人参与

条带显色不清，为什么？

western blot条带问题


western blot条带问题-1


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1楼 2017-05-15 14:17:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

qilong_2007

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的什么显色？
建议使用ECL化学发光法，发光信号较稳定，便于反复曝光操作，我们用的炎熙生物的试剂盒，建议去他们网站看看，有相关介绍。
http://www.biothrive.cn/Product/0294753539.html
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6楼2017-05-17 21:31:21
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F翔T

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

信号弱可以采用这几种办法来解决，1.延长曝光时间，曝光时间不是固定的，可以根据你信号的强弱来调整，如果信号比较强就短一点几秒甚至更短。2.采用超强发光液，会比普通的好很多哦。3.增加你的蛋白总量，总蛋白多了，目的蛋白就多了，这样一抗结合的就多了，然后结合上去的二抗，发光液就更多了，当然信号就会更强了。
背景比较脏，首先是封闭，其次就是没洗干净了，可以适当增加封闭时间，或一抗二抗过后洗的时间长一点。
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7楼2017-05-18 22:34:27
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普通回帖

蘑菇飞

新虫 (正式写手)
今天照的，发现条带显色都浅，右边有黑乎乎的，不知道是什么。求虫友解答。每一次拍照都要换膜吗？这个是换保鲜膜后拍的。显色1min。

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2楼2017-05-15 14:21:40
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蘑菇飞

新虫 (正式写手)
显色时间要求严格吗？原理是什么？新做wb，出的条带都不好。特来向广大虫友求助

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3楼2017-05-15 14:24:20
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
信号弱，膜不干净，曝光时间短。
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4楼2017-05-16 15:21:16
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蘑菇飞

新虫 (正式写手)
哦，谢谢。这个曝光时间1min，“信号弱”是因为蛋白含量少吗？

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5楼2017-05-16 17:02:31
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蘑菇飞

新虫 (正式写手)
谢谢，我试试加长洗的时间

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8楼2017-05-19 09:08:37
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______风车

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

左右条带亮度不一样，有可能是抗体没有孵育均匀，一抗二抗最好可以在摇床上。
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9楼2017-05-19 11:06:13
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zkapan

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2017-05-19 13:24:31
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