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质粒转化实验 已有2人参与
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向各位请教下关于DNA质粒转化实验。我最近在做质粒转化实验，将老师合成的质粒转入农杆菌中。第一步是将细胞从零下八十摄氏度中取出放入冰盒中半个小时，同时预冷两个1.5ml的离心管，待细胞融化后，将细胞分装于两个离心管（离心管已标注转化的质粒名称），各100ul,第二步：加入2ul的质粒，在冰上30分钟。热击（42度，45秒)，然后冰上放2分钟。第三步：加入SOC 0.9ml，然后在37度中培养一个小时，离心10分钟，4000转每分钟。涂板（Kan，LB），37度培养隔夜观察。老是只能看到几个菌落。 @biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端 |
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贱贱JMe
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-05-11 07:48:19
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你确定是使用农杆菌感受态来做的吗，按照你的描述应该是DH5α的操作步骤。如果确定是农杆菌转化，步骤是不正确的，而且农杆菌的生长需要2-3天，过夜没有很正常。 农杆菌转化步骤： 1、 加1ug DNA于200ul感受态细胞中，冰上放置30分钟。 2、液氮中冷冻1分钟。 3、37℃水浴溶化细胞。 4、 加1ml YEP培养基，28℃摇床培养2-4hr（低速）。 5、离心1分钟，悬浮细胞在100ul YEP培养基中。 6、涂板，28℃培养2-3天。 |
7楼2017-05-10 16:20:09
3楼2017-05-09 23:02:20
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-10 07:55:08
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-10 07:55:08
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转化弄杆菌:冰置30分钟，37度1分钟液氮2分钟重复一次，冰置5分钟，加不含抗生素LB，30度摇3个小时，涂板，30度倒置培养过夜。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-05-10 07:53:08
ljp7786
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