24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Zhibao1994

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1028.3
红花: 2
帖子: 210
在线: 36.3小时
虫号: 6143795
注册: 2017-03-25
专业: 植物病理学

[求助] 质粒转化实验已有2人参与

向各位请教下关于DNA质粒转化实验。我最近在做质粒转化实验，将老师合成的质粒转入农杆菌中。第一步是将细胞从零下八十摄氏度中取出放入冰盒中半个小时，同时预冷两个1.5ml的离心管，待细胞融化后，将细胞分装于两个离心管（离心管已标注转化的质粒名称），各100ul,第二步：加入2ul的质粒，在冰上30分钟。热击（42度，45秒)，然后冰上放2分钟。第三步：加入SOC 0.9ml，然后在37度中培养一个小时，离心10分钟，4000转每分钟。涂板（Kan，LB），37度培养隔夜观察。老是只能看到几个菌落。

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2017-05-08 23:50:45

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任

应助: 28 (小学生)
金币: 2599.9
散金: 438
红花: 14
帖子: 147
在线: 43.5小时
虫号: 3476243
注册: 2014-10-15
性别: GG
专业: 生物物理、生物化学与分子

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-05-11 07:48:19

你确定是使用农杆菌感受态来做的吗，按照你的描述应该是DH5α的操作步骤。如果确定是农杆菌转化，步骤是不正确的，而且农杆菌的生长需要2-3天，过夜没有很正常。
农杆菌转化步骤：
1、加1ug DNA于200ul感受态细胞中，冰上放置30分钟。
2、液氮中冷冻1分钟。
3、37℃水浴溶化细胞。
4、加1ml YEP培养基，28℃摇床培养2-4hr（低速）。
5、离心1分钟，悬浮细胞在100ul YEP培养基中。
6、涂板，28℃培养2-3天。