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孔佳琦

新虫 (小有名气)

[求助] GST标签蛋白表达已有1人参与

有没有谁用过pGEX-6P-1这个融合表达载体啊?
我是第一次做蛋白表达这方面的东西,有很多问题不是很明白,还望得到各位帮助。
我将通过PCR方法扩增出来的一个1000kb左右大小的蛋白的DNA,利用双酶切连到pGEX-6P-1载体上。诱导表达后,能够看到一个30KD左右的表达蛋白。这里我就不是很明白了,既然是融合表达,那么表达出来的蛋白是不是应该有50多KD呢?还是并不是我想象的这样?我的目的蛋白就是30多Kd标签蛋白20多kd,加起来应该是60多kd 可是为什么每次条带都和我的目的蛋白条带一样,我的蛋白是融合蛋白吗?标签蛋白是表达了还是没有表达呢?wb也是直接用抗我的蛋白的阳性血清做的,也成功了

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userwater

至尊木虫 (知名作家)

悠哉游哉

天天向上!!!
2楼2017-05-06 16:57:06
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
孔佳琦: 金币+500, 有帮助 2017-05-12 09:22:10
应该是1000bp吧。表达的不对,首先检查一下读码框对了没有。目的基因的第一个密码子是否紧跟融合蛋白的密码子,如果不是,分子量肯定对不上。
为什么
3楼2017-05-07 23:37:49
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4楼2017-05-13 18:29:51
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547star

木虫 (著名写手)

给的金币挺多,本想赞助回去,看看别人能帮你,回答你的问题没。发现没能赞助。如果还没有找出原因,要是方便,可以把实验的细节通过短消息或回帖告诉我,我尽量看看能不能解答。
为什么
5楼2017-05-13 22:44:55
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孔佳琦

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 1949stone at 2017-05-13 18:29:51

我把bp碱基对打错了,打一个就好了,还打这么多,而且我也发现了问题,不能算猪了

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6楼2017-05-14 00:07:03
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孔佳琦

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 547star at 2017-05-13 22:44:55
给的金币挺多,本想赞助回去,看看别人能帮你,回答你的问题没。发现没能赞助。如果还没有找出原因,要是方便,可以把实验的细节通过短消息或回帖告诉我,我尽量看看能不能解答。

谢谢你啦,我已经找到了问题的根源,那如果以后有关蛋白表达有什么问题可以在咨询你吗?

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7楼2017-05-14 00:08:36
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547star

木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 孔佳琦 at 2017-05-14 00:08:36
谢谢你啦,我已经找到了问题的根源,那如果以后有关蛋白表达有什么问题可以在咨询你吗?
...

欢迎
为什么
8楼2017-05-19 22:27:49
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zwp9308

新虫 (著名写手)

你好,请问可以请教一下么,最近也是用的pGEX-P-1的载体表达蛋白,跑SDS-PAGE也是只有GST大小的条带,请问你是怎么解决的呢?谢谢啦!

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9楼2021-09-06 21:51:07
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