| 查看: 769 | 回复: 3 | ||
[求助]
关于酶活性检测的问题 已有1人参与
|
|
关于酶的检测的，文献中说到的NADPH-generating system 是怎么参与到酶检测的，起到的作用是什么？这段就没怎么看懂，求能人指教 The incubation mixture, with a total volume of 200 μl, consisted of 100mM potassium phosphate buffer (pH 7.4), NADPH-generating system (1 mM NADP+, 10 mM glucose-6-phosphate, 1 unit/mL of glucose-6-phosphate dehydrogenase, and 4 mM MgCl2), and human liver microsomes or CYPs. In all experiments, NCMN (20 mM dissolved in acetonitrile previously) was serially diluted to the required concentrations and the final concentration of acetonitrile did not exceed 1% (v/v) in the mixture. After preincubation at 37oC for 3 min, the reaction was initiated by adding NADPH-generating system and further incubated at 37oC in a shaking water bath. The reaction was terminated by the addition of ice-cold acetonitrile (100 μl). The mixture was kept on ice until it was centrifuged at 20,000×g for 20 min at 4oC. Aliquots of supernatants were stored at -20oC until analysis. Aliquots of supernatants were taken for further fluorescence analysis (Gain = 60 for substrate and Gain =100 for metabolite). Control incubations without NADPH-generating system or without substrate or without CYP enzyme sources were carried out to investigate whether the formation of metabolite(s) was enzyme (CYP)- and NADPH-dependent. All incubations throughout the study were carried out in duplicate with SD.values generally below 10%. |
回复此楼» 猜你喜欢
今年春晚有几个节目很不错，点赞！
已经有6人回复
-
基金正文30页指的是报告正文还是整个申请书
已经有3人回复
-
球磨粉体时遇到了大的问题，请指教！
已经有15人回复
-
过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链
已经有5人回复
-
情人节自我反思：在爱情中有过遗憾吗？
已经有5人回复
-
江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助：淀粉酶活性
已经有0人回复
- 用Cocktail探针药物法对CYP450酶活性的评价
已经有0人回复
- 请教大家关于LDH试剂盒检测中的一个问题。。
已经有0人回复
- 求助关于免疫学实验的问题
已经有2人回复
- 求助关于免疫学实验的问题
已经有2人回复
- 求助关于免疫学实验的问题
已经有2人回复
- 关于短链脂肪酸的创新低精度测定方法
已经有1人回复
- 帮同学问的一个问题，关于一种试剂盒的。
已经有1人回复
- 同时分离血小板和红细胞
已经有15人回复
- 关于mRNA颈环结构影响结合活性的问题
已经有7人回复
- 关于苯丙氨酸解氨酶和丙二醛测定中遇到的问题
已经有1人回复
- 【综合问题讨论】植物活性氧与抗氧化酶测定
已经有26人回复
- ATP,ROS(活性氧），MTT检测
已经有1人回复
- 【求助/交流】关于MTT检测淋巴细胞活性的若干问题，请教各位大侠~~
已经有11人回复
- 【分享】蛋白质纯化个人总结2
已经有38人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
cai3110274
木虫 (职业作家)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 2955.6
- 散金: 2724
- 红花: 7
- 帖子: 3349
- 在线: 117.4小时
- 虫号: 1410159
- 注册: 2011-09-20
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
2楼2017-04-28 08:23:25
3楼2017-04-28 15:53:18
cai3110274
木虫 (职业作家)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 2955.6
- 散金: 2724
- 红花: 7
- 帖子: 3349
- 在线: 117.4小时
- 虫号: 1410159
- 注册: 2011-09-20
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
4楼2017-05-13 23:15:22