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cutepigxia新虫 (正式写手)
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求助蓝白斑筛选的相关问题 已有1人参与
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我涂的板为什么会培养基都变蓝色，而且也没有多少白菌，挑一两个看似白菌的菌落再划线到新制的含氨变青霉素，x-gal，IPTG的平板上结果都又是蓝色，想知道是什么原因，有木有人能给解释一下，谢谢！   发自小木虫Android客户端 |
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17楼2017-04-19 11:32:49
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蓝白斑的原理是α互补。JM109的LacZ基因缺少α片段，因此，不能分解x-gal显蓝色。质粒载体上有完整的α基因序列，多克隆位点也在这段序列内 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-04-18 11:45:33
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如果在这个位点插入了外源片段，将会破坏α阅读框，这种破坏大部分情况下会造成α基因失活。如果没有插入外源基因，α片段就可以表达，使得基因LacZ组装完整，分解x-gal显蓝色 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-04-18 11:49:09
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出现大片的蓝斑，一是可能根本没连上外源片段，全是自连接。二是插入的片段未能使α基因失活，虽然正确插入了，却依然是显蓝斑，这种情况一般常见于插入片段小于500bp，但是也有报道插入2000bp也依然无法失活α片段，显蓝色。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-04-18 11:52:48
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7楼2017-04-18 11:55:45
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8楼2017-04-18 11:56:48
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9楼2017-04-18 11:57:43
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10楼2017-04-18 11:59:39
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11楼2017-04-18 12:00:53
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蓝色集中，可能是在平板上涂布的x-gal，应该在倒板时，待培养基不烫手时，加amp，IPTG，x-gal，混匀后倒板，才会均一。另外貌似x-gal加多了，再确认一下浓度。 发自小木虫Android客户端 |
12楼2017-04-18 12:04:05
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2楼2017-04-18 10:56:52