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小松鼠45

捐助贵宾 (正式写手)
还有，你的平板那么集中，涂板也没涂开

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11楼2017-04-18 12:00:53
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小松鼠45

捐助贵宾 (正式写手)
蓝色集中，可能是在平板上涂布的x-gal，应该在倒板时，待培养基不烫手时，加amp，IPTG，x-gal，混匀后倒板，才会均一。另外貌似x-gal加多了，再确认一下浓度。

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12楼2017-04-18 12:04:05
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cutepigxia

新虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 小松鼠45 at 2017-04-18 12:04:05
蓝色集中，可能是在平板上涂布的x-gal，应该在倒板时，待培养基不烫手时，加amp，IPTG，x-gal，混匀后倒板，才会均一。另外貌似x-gal加多了，再确认一下浓度。

x-gal是参照说明书上2mg/ml配的加了100ul涂布，感受态用的dh5а

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13楼2017-04-18 12:19:52
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cutepigxia

新虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 小松鼠45 at 2017-04-18 12:04:05
蓝色集中，可能是在平板上涂布的x-gal，应该在倒板时，待培养基不烫手时，加amp，IPTG，x-gal，混匀后倒板，才会均一。另外貌似x-gal加多了，再确认一下浓度。

另外我用混匀的方法倒平板也是出现这种蓝色

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14楼2017-04-18 12:21:09
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cutepigxia

新虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by cutepigxia at 2017-04-18 12:19:52
x-gal是参照说明书上2mg/ml配的加了100ul涂布，感受态用的dh5а
...

x-gal是20mg/ml，即2%

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15楼2017-04-18 12:34:35
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你涂的太多了，菌落长不大，也挑不到单克隆。
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16楼2017-04-19 10:26:59
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547star

木虫 (著名写手)
涂布技术不过关，或者平板没晾干，或者涂太多，或者没有涂开，或者涂了没有吹干没有倒置平放。
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为什么
17楼2017-04-19 11:32:49
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小松鼠45

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by cutepigxia at 2017-04-18 12:19:52
x-gal是参照说明书上2mg/ml配的加了100ul涂布，感受态用的dh5а
...

x-gal用DMF溶解到20mg/mL，然后按照培养基体积千分之二添加的。不是涂布。
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18楼2017-04-19 19:05:28
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小松鼠45

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by cutepigxia at 2017-04-18 12:34:35
x-gal是20mg/ml，即2%
...

你确定是DH5α？我觉得你应该做一下空白对照。
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19楼2017-04-19 19:06:18
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cutepigxia

新虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 小松鼠45 at 2017-04-19 19:06:18
你确定是DH5α？我觉得你应该做一下空白对照。...

嗯我昨天做了空白对照，感觉感受态细胞不太对，没进行转化的感受态细胞涂板出现了蓝色，你说的那个加体积的0.2%x-gal是参照什么书籍来的？

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20楼2017-04-19 21:51:36
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