应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 【求助】Ni亲和层析 杂蛋白与目的蛋白一同被洗脱
231/3返回列表123下一页
查看: 2614  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lff20126206

新虫 (小有名气)

[求助] 【求助】Ni亲和层析 杂蛋白与目的蛋白一同被洗脱 已有2人参与

如题，用BL21表达蛋白，大小120KD，预测等电点为5.68。（PS：我扫描胶的效果不好，但能说明问题就行了）
细胞破碎液过镍柱后洗杂蛋白，并用含咪唑（50,100,150, 200, 300, 500mM）的咪唑洗脱液洗脱，总是有杂蛋白在洗脱液里。图中beas就是镍柱，表明我的蛋白是挂在镍柱上了。（PS：不知道为什么，诱导前后看不到我的目的蛋白表达量升高，之前小量诱导的时候，确定该蛋白能被诱导。）
尝试了用500mMNaCl洗脱（不含咪唑）杂蛋白，发洗脱中的杂带并未改善。
请教各位大侠，有什么办法可以解决这个问题？

【求助】Ni亲和层析 杂蛋白与目的蛋白一同被洗脱
图片1.png@gyesang@hc-material
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-04-13 14:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lff20126206

新虫 (小有名气)
好的，多谢指点，之前还考虑过完镍柱再过分子筛，因为我的蛋白比较大，杂带都在下面

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2017-04-14 08:11:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eggplant1993

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
50mM咪唑目的蛋白就洗脱下来了，可以考虑先用更低的咪唑梯度洗脱杂蛋白或者在破碎细胞液里加低浓度咪唑（5-20mM）减少镍柱非特异性吸附。后面咪唑梯度洗脱不要那么细减少目的蛋白损失，再考虑用离子交换看能否去除杂蛋白。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2017-04-15 22:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lff20126206

新虫 (小有名气)
请大神们帮帮我啊，悬赏金币啊！
赞一下 回复此楼
2楼2017-04-13 14:45:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lff20126206

新虫 (小有名气)
顶上去，谢谢大家
回复此楼
3楼2017-04-13 17:15:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lff20126206

新虫 (小有名气)
顶一个
回复此楼
4楼2017-04-13 17:16:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名
本帖仅楼主可见
5楼2017-04-13 17:36:34
已阅   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

学习达人123

铁虫 (初入文坛)
我的蛋白也是这样，蛋白又少条带又杂，跪求答案

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-04-13 21:46:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
再过个离子交换吧，镍柱纯化效果没有想象的那么高，除非你的蛋白表达量超高，否则还是要进一步纯化的
赞一下 回复此楼
7楼2017-04-13 23:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lff20126206

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-04-13 23:05:29
再过个离子交换吧，镍柱纯化效果没有想象的那么高，除非你的蛋白表达量超高，否则还是要进一步纯化的

请问大神，建议是先过离子柱还是先过镍柱呢？
多谢多谢~

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-04-14 07:57:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lff20126206 at 2017-04-14 07:57:57
请问大神，建议是先过离子柱还是先过镍柱呢？
多谢多谢~
...

先过镍柱，再过离子交换。记得过完镍柱把蛋白浓缩一下顺便换一下缓冲液除去咪唑
赞一下 回复此楼
9楼2017-04-14 08:08:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lff20126206 的主题更新
231/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +10 顾九笙要谦虚 2026-03-24 14/700 2026-03-26 01:09 by 15366876211
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 311求调剂 +4 勇敢的小吴 2026-03-20 4/200 2026-03-25 18:12 by xcjcqu
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +6 NIFFFfff 2026-03-20 6/300 2026-03-24 21:02 by hello七七
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 7/350 2026-03-24 11:23 by 种大树
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭