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lff20126206新虫 (小有名气)
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【求助】Ni亲和层析 杂蛋白与目的蛋白一同被洗脱 已有2人参与
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如题，用BL21表达蛋白，大小120KD，预测等电点为5.68。（PS：我扫描胶的效果不好，但能说明问题就行了） 细胞破碎液过镍柱后洗杂蛋白，并用含咪唑（50,100,150, 200, 300, 500mM）的咪唑洗脱液洗脱，总是有杂蛋白在洗脱液里。图中beas就是镍柱，表明我的蛋白是挂在镍柱上了。（PS：不知道为什么，诱导前后看不到我的目的蛋白表达量升高，之前小量诱导的时候，确定该蛋白能被诱导。） 尝试了用500mMNaCl洗脱（不含咪唑）杂蛋白，发洗脱中的杂带并未改善。 请教各位大侠，有什么办法可以解决这个问题？  图片1.png@gyesang@hc-material |
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