| 查看: 2548 | 回复: 22 | ||
lff20126206新虫 (小有名气)
|
[求助]
【求助】Ni亲和层析 杂蛋白与目的蛋白一同被洗脱 已有2人参与
|
|
|
如题，用BL21表达蛋白，大小120KD，预测等电点为5.68。（PS：我扫描胶的效果不好，但能说明问题就行了） 细胞破碎液过镍柱后洗杂蛋白，并用含咪唑（50,100,150, 200, 300, 500mM）的咪唑洗脱液洗脱，总是有杂蛋白在洗脱液里。图中beas就是镍柱，表明我的蛋白是挂在镍柱上了。（PS：不知道为什么，诱导前后看不到我的目的蛋白表达量升高，之前小量诱导的时候，确定该蛋白能被诱导。） 尝试了用500mMNaCl洗脱（不含咪唑）杂蛋白，发洗脱中的杂带并未改善。 请教各位大侠，有什么办法可以解决这个问题？  图片1.png@gyesang@hc-material |
回复此楼» 猜你喜欢
过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链
已经有9人回复
-
体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低
已经有6人回复
-
今年春晚有几个节目很不错，点赞！
已经有10人回复
-
情人节自我反思：在爱情中有过遗憾吗？
已经有10人回复
-
基金正文30页指的是报告正文还是整个申请书
已经有5人回复
lff20126206
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 238.5
- 散金: 5
- 帖子: 113
- 在线: 36.5小时
- 虫号: 3493364
- 注册: 2014-10-23
- 专业: 植物遗传学
10楼2017-04-14 08:11:16
eggplant1993
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1881
- 沙发: 1
- 帖子: 167
- 在线: 104.7小时
- 虫号: 4832774
- 注册: 2016-07-11
- 性别: MM
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
50mM咪唑目的蛋白就洗脱下来了，可以考虑先用更低的咪唑梯度洗脱杂蛋白或者在破碎细胞液里加低浓度咪唑（5-20mM）减少镍柱非特异性吸附。后面咪唑梯度洗脱不要那么细减少目的蛋白损失，再考虑用离子交换看能否去除杂蛋白。 发自小木虫Android客户端 |
15楼2017-04-15 22:48:35
lff20126206
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 238.5
- 散金: 5
- 帖子: 113
- 在线: 36.5小时
- 虫号: 3493364
- 注册: 2014-10-23
- 专业: 植物遗传学
2楼2017-04-13 14:45:10
lff20126206
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 238.5
- 散金: 5
- 帖子: 113
- 在线: 36.5小时
- 虫号: 3493364
- 注册: 2014-10-23
- 专业: 植物遗传学
3楼2017-04-13 17:15:59
lff20126206
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 238.5
- 散金: 5
- 帖子: 113
- 在线: 36.5小时
- 虫号: 3493364
- 注册: 2014-10-23
- 专业: 植物遗传学
4楼2017-04-13 17:16:28
 本帖仅楼主可见 |
5楼2017-04-13 17:36:34
学习达人123
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 29.3
- 帖子: 6
- 在线: 2.4小时
- 虫号: 4167814
- 注册: 2015-10-23
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2017-04-13 21:46:43
绝对零度的笑
木虫 (正式写手)
- 应助: 41 (小学生)
- 金币: 3155.8
- 散金: 26
- 红花: 6
- 帖子: 899
- 在线: 95.8小时
- 虫号: 245021
- 注册: 2006-04-22
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
7楼2017-04-13 23:05:29
lff20126206
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 238.5
- 散金: 5
- 帖子: 113
- 在线: 36.5小时
- 虫号: 3493364
- 注册: 2014-10-23
- 专业: 植物遗传学
8楼2017-04-14 07:57:57
绝对零度的笑
木虫 (正式写手)
- 应助: 41 (小学生)
- 金币: 3155.8
- 散金: 26
- 红花: 6
- 帖子: 899
- 在线: 95.8小时
- 虫号: 245021
- 注册: 2006-04-22
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
9楼2017-04-14 08:08:50