9楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-04-14 08:08:50
先过镍柱，再过离子交换。记得过完镍柱把蛋白浓缩一下顺便换一下缓冲液除去咪唑...

12楼: Originally posted by Silence_D at 2017-04-14 17:24:27
表达量低，而且还大部分在包涵体...可尝试优化上清表达

14楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2017-04-15 16:37:19
首先120kd蛋白在大肠杆菌里表达本来就有难度，表达量低是肯定的，按照市面上镍柱的吸附能力一般都能达到1ml20mg以上，当你的目的蛋白减少时，其他杂蛋白和柱子的非特异性结合也随着增高，可以多表达一些，按比例少用 ...

15楼: Originally posted by eggplant1993 at 2017-04-15 22:48:35
50mM咪唑目的蛋白就洗脱下来了，可以考虑先用更低的咪唑梯度洗脱杂蛋白或者在破碎细胞液里加低浓度咪唑（5-20mM）减少镍柱非特异性吸附。后面咪唑梯度洗脱不要那么细减少目的蛋白损失，再考虑用离子交换看能否去除杂 ...

16楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2017-04-15 23:07:55
镍柱纯化效果没有理想中那么好，一般后续还要跟离子柱和分子筛。镍柱一般都是高盐上样，减少特异性吸附。接离子柱的时候电导尽量稀释到低一些。