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lff20126206新虫 (小有名气)
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[求助]
【求助】Ni亲和层析 杂蛋白与目的蛋白一同被洗脱已有2人参与
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如题，用BL21表达蛋白，大小120KD，预测等电点为5.68。（PS：我扫描胶的效果不好，但能说明问题就行了） 细胞破碎液过镍柱后洗杂蛋白，并用含咪唑（50,100,150, 200, 300, 500mM）的咪唑洗脱液洗脱，总是有杂蛋白在洗脱液里。图中beas就是镍柱，表明我的蛋白是挂在镍柱上了。（PS：不知道为什么，诱导前后看不到我的目的蛋白表达量升高，之前小量诱导的时候，确定该蛋白能被诱导。） 尝试了用500mMNaCl洗脱（不含咪唑）杂蛋白，发洗脱中的杂带并未改善。 请教各位大侠，有什么办法可以解决这个问题？  图片1.png@gyesang@hc-material |
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wuhu0612331
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首先120kd蛋白在大肠杆菌里表达本来就有难度，表达量低是肯定的，按照市面上镍柱的吸附能力一般都能达到1ml20mg以上，当你的目的蛋白减少时，其他杂蛋白和柱子的非特异性结合也随着增高，可以多表达一些，按比例少用点柱料，裂解液里加10mm咪唑试试。可以参考一下。 发自小木虫Android客户端 |
14楼2017-04-15 16:37:19
lff20126206
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2楼2017-04-13 14:45:10
lff20126206
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5楼2017-04-13 17:36:34