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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » QPCR溶解曲线问题
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急躁的小脾气

新虫 (初入文坛)

[求助] QPCR溶解曲线问题

求助大神。。。
开始我用普通PCR跑了这对引物，也跑了胶，结果还蛮好的，没有引物二聚体和非特异性，产物长度也是对的，283bp。
但是用QPCR做了之后，大多数溶解曲线出现双峰，还有的峰的位置都变了。
求大神赐教，我这种情况是样本被污染了吗？

QPCR溶解曲线问题
AC07F37566F8953944E91A807B6F2A8D.jpg@biostar2009
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1楼 2017-04-10 15:29:23
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急躁的小脾气

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 大东红日 at 2017-04-13 08:52:18
产物长度太大。qPCR最佳是在80-150之间

哦   您确定是这个原因不？我在网上查到过说是75bp-300bp之间都可以，您是有遇到过和我一样的情况？？
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12楼2017-04-17 16:57:28
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idealgas

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-12 22:13:11
确切说qPCR条件跟普通pcr条件不一样，检测精度也不一样，经验告诉我用普通pcr检测q的不能说明什么问题。另外电泳的检测灵敏度也可能看不到非特异性扩增产生的条带，而

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2楼2017-04-10 16:46:38
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深海看星

新虫 (初入文坛)
有的时候普通p跑出来的qpcr也不一定能跑出来。普通p只是大概看下引物特异性。

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3楼2017-04-10 16:53:36
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急躁的小脾气

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by idealgas at 2017-04-10 16:46:38
确切说qPCR条件跟普通pcr条件不一样，检测精度也不一样，经验告诉我用普通pcr检测q的不能说明什么问题。另外电泳的检测灵敏度也可能看不到非特异性扩增产生的条带，而
...

那我的结果里有些溶解曲线是可取的，这几条能用吗？

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4楼2017-04-10 21:51:40
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