| 查看: 2731 | 回复: 5 | ||
[求助]
Kpn1和xba1酶切链接 已有3人参与
|
|
我用含有kpn1和xba1的引物扩的PCR，然后做酶切（和载体PCDNA3.1一起），然后做链接转化，为什么连出来的有些质粒要么和空载一样大要么比我空载体还小？有没有可能是xba1甲基化的问题啊？？求各位大神指点。一下是我引物： CTGTGGGTACC[KpnⅠ]TGACATGGACTACAAAGACGATGACGACAAG CTGTCGTCTAGA[XbaⅠ]GCACTAAGCGTAGTCTGGAACGTCGTATGGATA |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有64人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Xba1和Kpn1双酶切
已经有14人回复
- 连接转化假阳性提不出来质粒吗？
已经有8人回复
- 双酶切载体切不开
已经有3人回复
- Kpnl和Xbal双酶切
已经有5人回复
- pcambia1300中，使用Kpn与BamH双酶切，后连接一直得不到阳性克隆
已经有1人回复
路人甲007
木虫 (正式写手)
小七
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3797.9
- 红花: 2
- 帖子: 597
- 在线: 206.8小时
- 虫号: 840731
- 注册: 2009-09-04
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2017-03-28 22:19:01
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- MolEPI: 1
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17175
- 散金: 1654
- 红花: 121
- 沙发: 41
- 帖子: 14525
- 在线: 2184.9小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
3楼2017-03-31 09:09:55
ken19860823
木虫 (正式写手)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 3574.2
- 红花: 9
- 帖子: 875
- 在线: 107.4小时
- 虫号: 3150033
- 注册: 2014-04-20
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:46:20
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:46:20
|
酶切连接假阳性还是有，双酶切的假阳性较少，推测你已经拿到阳性克隆。克隆方面有时候是会莫名其妙，但是只要不是特殊占多数都没问题。至于你的问题，应该是载体片段比目的片段摩尔比过高(1:3)。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-03-31 15:01:10
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:46:41
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:46:41
|
建议不要用PCR产物双酶切，可以试试将产物连接t载体之后再切下来，连目的载体，另外一楼的方法不错，同源重组更高效。 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-04-01 00:17:59
winyuyuyu123
金虫 (小有名气)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 813.3
- 红花: 2
- 帖子: 68
- 在线: 25.3小时
- 虫号: 4912791
- 注册: 2016-08-12
- 专业: 病原真菌学
6楼2017-04-01 10:02:46
