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Kpn1和xba1酶切链接 已有3人参与
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我用含有kpn1和xba1的引物扩的PCR，然后做酶切（和载体PCDNA3.1一起），然后做链接转化，为什么连出来的有些质粒要么和空载一样大要么比我空载体还小？有没有可能是xba1甲基化的问题啊？？求各位大神指点。一下是我引物： CTGTGGGTACC[KpnⅠ]TGACATGGACTACAAAGACGATGACGACAAG CTGTCGTCTAGA[XbaⅠ]GCACTAAGCGTAGTCTGGAACGTCGTATGGATA |
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jurkat.1640
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3楼2017-03-31 09:09:55
路人甲007
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:46:20
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:46:20
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酶切连接假阳性还是有，双酶切的假阳性较少，推测你已经拿到阳性克隆。克隆方面有时候是会莫名其妙，但是只要不是特殊占多数都没问题。至于你的问题，应该是载体片段比目的片段摩尔比过高(1:3)。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-03-31 15:01:10
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:46:41
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-01 07:46:41
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建议不要用PCR产物双酶切，可以试试将产物连接t载体之后再切下来，连目的载体，另外一楼的方法不错，同源重组更高效。 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-04-01 00:17:59
