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nieli

银虫 (小有名气)

[求助] 高效液相色谱重复性问题 已有4人参与

各位虫友,我最近在用高效液相色谱测盐酸土霉素准品时,同一浓度连进6针,峰面积相差很大,相对标准偏差达到16%,保留时间几乎不变,有没有遇到这类问题的虫友,请教下是什么原因啊?万分感谢~改流动相组成、波长、换柱子还是有这种问题(ps:有定量环,可以排除进样量不一样的情况;用同一台液相测别的物质,重现性较好,相对标准偏差在1%,说明仪器和人为操作应该也没问题)

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liyufeiyong

金虫 (小有名气)

分析一下,你的标准品是否降解?你的对照品面积是怎么变化的,有数据么?

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化学学习有我
2楼2017-03-24 19:30:11
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木易十日十月

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
样品相应值咋样,浓度不要过高或低,样品应该没有明显的起泡吧。

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3楼2017-03-24 20:44:20
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大爷走好

新虫 (初入文坛)

保留时间不变说明流量稳定,多从进样系统找问题,进样器流路气泡,密封泄露,等等

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7楼2017-03-24 22:36:16
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木易十日十月

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by nieli at 2017-03-24 22:11:13
响应值在60多万,浓度不算高也不算低,峰形有点拖尾。请问样品用超声脱气后的超纯水溶解的,应该没气泡
...

建议检查下进样方法。什么品牌的进样器?是否带空气隔离?样品粘度高吗?有定量环,那你是手动进样,满环?自动进样是满环进样?满环进样一般不会超高1%如果是部分进样是有一定误差但不应该超过6%,通常应确保在3%一下否则数据不够可信。
这个不行再考虑其它,如果你怀疑色谱柱可以找一跟好的试一下。

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8楼2017-03-24 23:01:26
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木易十日十月

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 木易十日十月 at 2017-03-24 23:01:26
建议检查下进样方法。什么品牌的进样器?是否带空气隔离?样品粘度高吗?有定量环,那你是手动进样,满环?自动进样是满环进样?满环进样一般不会超高1%如果是部分进样是有一定误差但不应该超过6%,通常应确保在3%一下否 ...

对了如果是自动进样器,还要注意洗针与残留,是否合适,另外是否使用预开口样品瓶,不要拧太紧,观察针头瓶盖是否有挂珠,尽可能排除问题。

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9楼2017-03-24 23:08:11
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忍冬1018

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议如下:
1、如是手动进样,进样体积最好是定量环的2倍以上,如20μl定量环,进样量在50μl以上;
2、查看积分是否正常,如果拖尾很严重而峰面积又比较小的话,积分影响会尤其大;
3、可以更换适用的色谱柱或是优化色谱条件进行试验。

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10楼2017-03-25 08:59:29
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baby鑫

新虫 (初入文坛)

保留值一样说明物质组成没有变,但是峰面积定量分析相差那么多,应该是溶液不均匀

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17楼2017-03-27 07:15:13
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忍冬1018

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

先按照CP2015药典方法试试,看主峰与杂质峰的分离度是否符合要求,另外,可以新配置1个样品检测看看。由于盐酸土霉素溶解度不是很好,建议超声处理15min溶解使完全,取续滤液检测,观察结果。
20楼2017-03-27 11:04:45
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llw1986

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

有没有检查过进样针是否有漏液或者堵塞之类的?
22楼2017-03-28 10:21:26
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普通回帖
4楼2017-03-24 21:09:13
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nieli

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by liyufeiyong at 2017-03-24 19:30:11
分析一下,你的标准品是否降解?你的对照品面积是怎么变化的,有数据么?

标准品性质挺稳定的,标准储备液放冰箱避光保存。峰面积几乎都是第一针最大,第二针最小,往后几针在它们两个值的之间波动,第一针峰面积是第二针的大约1.3倍

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5楼2017-03-24 22:06:34
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nieli

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 木易十日十月 at 2017-03-24 20:44:20
样品相应值咋样,浓度不要过高或低,样品应该没有明显的起泡吧。

响应值在60多万,浓度不算高也不算低,峰形有点拖尾。请问样品用超声脱气后的超纯水溶解的,应该没气泡

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6楼2017-03-24 22:11:13
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