| 查看: 1296 | 回复: 10 | |||
[交流]
菌液pcr
|
|||
|
现在挑取单菌落，20ul体系，出现模糊的条带，引物二聚体很严重，请问大家怎么能p出条带，避免引物二聚体的出现？引物啊现在已经是0.5ul了 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有215人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
976592787
木虫 (正式写手)
国家自然科学基金委员会委员长
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 2365.1
- 散金: 999
- 红花: 10
- 帖子: 870
- 在线: 179.8小时
- 虫号: 2823824
- 注册: 2013-11-24
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-31 21:35:55
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-31 21:35:55
|
引物浓度多大的，是10uM的吗，该不会是100uM的吧？标准的使用应该是50ul体系用1ul，我们用菌液pcr只使用体系10ul，不知道你用的什么酶，taq还是pfu或者primerstar酶？是什么模板啊，待验证质粒的还是已验证的用来p片段做克隆的啊，你不说清楚怎么给你解决？ 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-01-31 20:09:37
2楼2017-01-31 11:13:00
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-31 21:36:13
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-31 21:36:13
|
菌沾一下下就行，我做的是青枯，在选择培养基上培养出来的单菌落条带不是很亮，纯培养以后条带很亮，二聚体很少。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-01-31 20:43:05
痞子无敌
金虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1223.7
- 散金: 4
- 红花: 3
- 帖子: 332
- 在线: 49.5小时
- 虫号: 2409834
- 注册: 2013-04-09
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2017-02-01 08:42:34
strmond
铁虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3278
- 散金: 10
- 帖子: 216
- 在线: 36.1小时
- 虫号: 2416902
- 注册: 2013-04-14
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
6楼2017-02-01 09:14:48
7楼2017-02-01 11:49:40
8楼2017-02-01 11:50:25
|
我的引物浓度10um，用的green. mix酶，做宏基因组文库的筛选，用于p ks片段，最后测序用。但是之前菌夜pcr还是很好的，现在做菌落pcr为什么引物二聚体这么多么？今天老师说菌的数量有些多，是不是这么个道理，还说泡胶时间要长一些？ 发自小木虫Android客户端 |
9楼2017-02-01 11:55:30
strmond
铁虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3278
- 散金: 10
- 帖子: 216
- 在线: 36.1小时
- 虫号: 2416902
- 注册: 2013-04-14
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
10楼2017-02-01 13:01:46
30