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菌液pcr
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现在挑取单菌落，20ul体系，出现模糊的条带，引物二聚体很严重，请问大家怎么能p出条带，避免引物二聚体的出现？引物啊现在已经是0.5ul了 发自小木虫Android客户端 |
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-01-31 21:35:55
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引物浓度多大的，是10uM的吗，该不会是100uM的吧？标准的使用应该是50ul体系用1ul，我们用菌液pcr只使用体系10ul，不知道你用的什么酶，taq还是pfu或者primerstar酶？是什么模板啊，待验证质粒的还是已验证的用来p片段做克隆的啊，你不说清楚怎么给你解决？ 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-01-31 20:09:37
2楼2017-01-31 11:13:00
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菌沾一下下就行，我做的是青枯，在选择培养基上培养出来的单菌落条带不是很亮，纯培养以后条带很亮，二聚体很少。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-01-31 20:43:05
痞子无敌
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5楼2017-02-01 08:42:34
strmond
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6楼2017-02-01 09:14:48
7楼2017-02-01 11:49:40
8楼2017-02-01 11:50:25
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我的引物浓度10um，用的green. mix酶，做宏基因组文库的筛选，用于p ks片段，最后测序用。但是之前菌夜pcr还是很好的，现在做菌落pcr为什么引物二聚体这么多么？今天老师说菌的数量有些多，是不是这么个道理，还说泡胶时间要长一些？ 发自小木虫Android客户端 |
9楼2017-02-01 11:55:30
strmond
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10楼2017-02-01 13:01:46